[發(fā)明專利]一種中成藥“二丁顆?！盚PLC指紋圖譜的構(gòu)建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610030725.4
• 申請日: 2016-01-18
• 公開（公告）號: CN105699506B
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐云;任晶;趙源慧;白冰;徐建;趙俞
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 吉林省長春市新時(shí)代專利商標(biāo)代理有限公司22204
• 代理人: 孫國振

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及中成藥HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

中國藥典2015年版一部公開了由紫花地丁、半邊蓮、蒲公英、板藍(lán)根四味組成的清熱解毒中成藥(商品名：二丁顆粒)的質(zhì)量控制方法，包括顆粒的性狀；紫花地丁中秦皮乙素成分及蒲公英中咖啡酸成分的薄層鑒別；秦皮乙素的含量測定。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只控制一味藥的一種成分的含量測定及單一成分的定性鑒別，難以從整體上反應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)量或從整體上控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

中藥及其制劑均為多組分復(fù)雜體系，因此評價(jià)其質(zhì)量應(yīng)采用與之相適應(yīng)的，能提供豐富鑒別信息的檢測方法，但現(xiàn)行的顯微鑒別、理化鑒別和含量測定等方法都不足以解決這一問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種中成藥“二丁顆?！盚PLC指紋圖譜的構(gòu)建方法，用于二丁顆粒生產(chǎn)中的質(zhì)量控制，克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，

本發(fā)明的二丁顆粒指紋圖譜的構(gòu)建方法包括如下步驟：

1、供試品溶液的制備：取二丁顆粒研細(xì)粉末2～5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％～100％的甲醇溶液10～50ml，稱定重量，超聲提取20～40分鐘，再稱定重量，用上述溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2、對照品溶液的制備：取秦皮乙素對照品適量，用50％～100％的甲醇溶液溶解，制成每1ml含秦皮乙素20μg的溶液，即得。

色譜條件：Agilent ZORBAX SB‐C18(5μm，4.6×250mm)柱為色譜柱，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為0.4％磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1ml/min，柱溫30～40℃，檢測波長為330～360nm。

3、測定：精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到二丁顆粒的指紋圖譜。

本發(fā)明二丁顆粒的指紋圖譜的最佳建立方法如下：

1、供試品溶液的制備：取二丁顆粒研細(xì)粉末約5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，稱定重量，超聲提取30分鐘，再稱定重量，用70％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2、對照品溶液的制備：取秦皮乙素對照品適量，用70％的甲醇溶液溶解，制成每1ml含秦皮乙素20μg的溶液，即得。

色譜條件：Agilent ZORBAX SB‐C18(5μm，4.6×250mm)柱為色譜柱，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為0.4％磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1ml/min，柱溫35℃，檢測波長為353nm。

梯度洗脫過程中，流動(dòng)相A、B的比例變化為：0～5min，A相5％～22％，B相95％～78％；5～15min，A相22％～25％，B相78％～75％；15～25min，A相25％～28％，B相75％～72％；25～40min，A相28％～30％，B相72％～70％；40～50min，A相30％～40％，B相70％～60％；50～60min，A相40％～45％，B相60％～55％；60～75min，A相45％～60％，B相55％～40％。即梯度洗脫程序梯度洗脫程序以如下體積比濃度配置進(jìn)行：

表1 梯度洗脫程序表

3、測定：精密吸取供試品溶液5～20μl注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到二丁顆粒的指紋圖譜。

用前述二丁顆粒指紋圖譜的構(gòu)建方法建立10批次二丁顆粒HPLC指紋圖譜，采用國家藥典委員會(huì)“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)(2004年A版)”生成有8個(gè)共有峰構(gòu)成的二丁顆粒HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。其中第2號峰為秦皮乙素峰、3號峰為咖啡酸峰。如圖3所示。

在標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，以秦皮乙素峰為參照峰S峰，計(jì)算各共有峰與S峰的相對保留時(shí)間，所述相對保留時(shí)間在第一規(guī)定值的±8％之內(nèi)，所述第一規(guī)定值為：0.75‐峰1、1.00‐峰S、1.04‐峰3、1.37‐峰4、1.47‐峰5、2.00‐峰6、2.20‐峰7、2.66‐峰8；所述共有峰的峰面積在第二規(guī)定值的±20％之內(nèi)，所述第二規(guī)定值為：0.23‐峰1、1.00‐峰S、0.05‐峰3、0.04‐峰4、0.03‐峰5、0.10‐峰6、0.18‐峰7、0.17‐峰8。

取二丁顆粒樣品，按上述同法操作，得到二丁顆粒樣品指紋圖譜，采用國家藥典委員會(huì)“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)(2004年A版)”軟件對二丁顆粒標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜和樣品指紋圖譜進(jìn)行分析，相似度大于0.90。

二丁顆粒相關(guān)性研究：共有峰的歸屬