[發明專利]用于雞傳染性支氣管炎病毒RT-PCR分型檢測的試劑盒

有效

• 申請號: 201610029744.5
• 申請日: 2016-01-18
• 公開（公告）號: CN105463136B
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 廖敏;雷靜;周繼勇;方祥年
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

1.一種用于雞傳染性支氣管炎病毒RT-PCR分型檢測的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括下述三對引物：根據傳染性支氣管炎病毒的S1基因片段設計的通用引物和4/91類型毒株特異性引物，以及根據nsp12基因片段設計的腎型毒株特異性引物；

所述三對引物的序列如下：

通用-F：5'-CCAAAGTGCCTTCAGACC-3'

通用-R：5'-GCTAGACCAAGCCATACC-3'

4/91-F：5'-ATGTCTTGGTCAGTTTCA-3'

4/91-R：5'-AACAAGATCACCATTTA-3'

腎型-F：5'-GTGGTTTAGGTGTAGATGTA-3'

腎型-R：5'-TAAGAAATCATCAAGCAAAAGG-3'。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括下述成分：

（1）RNA提取試劑：Trizol試劑；

（2）反轉錄試劑：0.2μg/μl的Random primer，DEPC水，5×buffer，10mM的dNTP，20u/μl的Rnase抑制劑，200u/μl 的M-MuLV；

（3）PCR反應試劑：20u/μl的 ExTaq酶，2.5mM的 dNTP，10×buffer；

（4）分型引物：所述通用引物、4/91類型毒株特異性引物和腎型毒株特異性引物，引物濃度均為10mM；

（5）陽性對照樣品：包括呼吸型M41毒株、4/91毒株和腎型毒株SC021202感染的雞胚尿囊液抽提RNA的反轉錄產物cDNA；

（6）陰性對照樣品：正常雞胚尿囊液抽提RNA的反轉錄產物cDNA。