[發(fā)明專利]一種提取核酸的方法及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610023898.3
• 申請(qǐng)日: 2016-01-14
• 公開（公告）號(hào): CN105462961B
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李民;周如華;石云杰;張健;王鑫;張偉;李鵬飛;畢萬里;王志峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州市公安局;蘇州新海生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 常亮

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種提取核酸的方法及試劑盒。本發(fā)明所述方法向待提取樣品中加入裂解液裂解釋放核酸分子，然后加入吸附核酸的材料以及結(jié)合液對(duì)核酸分子進(jìn)行吸附，獲得核酸?吸附材料復(fù)合物；將核酸?吸附材料復(fù)合物洗滌后，用含有表面活性劑的水溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，收集洗脫下來的溶液，獲得目標(biāo)核酸分子。本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有提取核酸的方法的缺陷，在洗脫環(huán)節(jié)中將表面活性劑加入到洗脫液中，進(jìn)而提高了洗脫核酸的得率，獲得更多量的核酸分子，同時(shí)提取后的核酸長久保存而不被吸附在管壁或者被核酸酶降解，眼饞了核酸分子的保存時(shí)間。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的說是涉及一種提取核酸的方法及試劑盒。

背景技術(shù)

作為攜帶遺傳信息的重要物質(zhì)，核酸通常存在于復(fù)雜的實(shí)際樣品中，例如血液，細(xì)胞，糞便，樹葉等等。這些樣品中的核酸通常無法直接被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和檢測，需要進(jìn)一步的純化以去除干擾物質(zhì)才能進(jìn)行下游的一些實(shí)驗(yàn)和分析。

分離提取核酸的方法在文獻(xiàn)中多有報(bào)道(e.g.Chapter 2(DNA)and Chapter 4(RNA)of F.Ausubel et al.,eds.,Current Protocols in Molecular Biology,Wiley-Interscience,New York,1993)。這些方法通常需要將樣品在一定溶液中重懸并通過化學(xué)試劑或者酶的方法將細(xì)胞破裂，將核酸釋放出來。這一過程稱為裂解。釋放出的核酸在溶液中會(huì)可逆的結(jié)合于吸附核酸的材料上。這些材料包括玻璃顆粒，玻璃纖維，磁珠，硅藻土，硅膠等，或者以上各種材料的變化或組合。高濃度的離液鹽將有利于核酸結(jié)合到上述材料上。在接下來的步驟中，通過離心或者加入磁場等外界作用力，收集這些結(jié)合核酸的材料。這些結(jié)合核酸的材料接下來會(huì)被特定溶液洗滌，例如80％乙醇，以去除雜質(zhì)。最后這些結(jié)合核酸的材料會(huì)被洗脫液處理并將核酸洗脫下來，一般是加熱至60度并以重蒸水進(jìn)行洗脫。以此原理為基礎(chǔ)，研究者報(bào)道了大量的提取核酸的方法。(e.g.US 5,075,430；Marko et al.,Anal.Biochem.121,382-387,1982；Vogelstein et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)76,615-619,1979；Boom et al.,J.Clin.Microbiol.28,495-503,1990；Chen and Thomas,Anal.Biochem.101,339-341,1980)。但是，目前的核酸提取方法在經(jīng)過洗脫后所獲得的核酸分子的量仍然不夠理想，需要進(jìn)一步改進(jìn)。

另外，在實(shí)際應(yīng)用中，隨著時(shí)間的推移，洗脫下來的核酸并不能穩(wěn)定保存。這樣，通過上述方法提取的核酸分子如果不能馬上進(jìn)行下游的分析實(shí)驗(yàn)，而是存放起來的話，核酸分子就存在著不穩(wěn)定的風(fēng)險(xiǎn)，也不利于下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)在以后實(shí)驗(yàn)中的重復(fù)。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種提取核酸的方法及基于所述方法的試劑盒，使得所述方法能夠提取更多量的核酸分子；

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種提取核酸的方法及基于所述方法的試劑盒，使得所述方法提取的核酸分子在4度條件下保存20天后仍能成功擴(kuò)增并有效分型。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種提取核酸的方法，包括：

步驟1、向待提取樣品中加入裂解液裂解解釋放核酸分子，然后加入吸附核酸的材料以及結(jié)合液對(duì)核酸分子進(jìn)行吸附，獲得核酸-吸附材料復(fù)合物；

步驟2、將核酸-吸附材料復(fù)合物洗滌后，用含有表面活性劑的水溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，收集洗脫下來的溶液，獲得目標(biāo)核酸分子。

為了能夠獲得更多量的核酸分子，本發(fā)明在洗脫液中增加了表面活性劑，一方面有利于提高洗脫的得率，獲得更多量的核酸分子；另一方面表面活性劑也有利于提取后的核酸長久保存而不被吸附在管壁或者被核酸酶降解。