[發(fā)明專利]治療腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療組合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610021438.7
• 申請(qǐng)日: 2016-01-13
• 公開（公告）號(hào): CN106967681B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 嚴(yán)勇朝;朱益林;陳思毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京馬力喏生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783;C12N5/10;C12N7/01;C12N15/867;A61K48/00;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

本發(fā)明為治療腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療組合物，提出了一種轉(zhuǎn)基因淋巴細(xì)胞、一種構(gòu)建體和一種治療癌癥的治療組合物，該轉(zhuǎn)基因淋巴細(xì)胞的細(xì)胞檢查點(diǎn)被沉默、表達(dá)無功能EGFR受體以及表達(dá)嵌合抗原受體。該轉(zhuǎn)基因淋巴細(xì)胞具有抵抗腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的免疫抑制的特性，對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力顯著增強(qiáng)，尤其對(duì)EGFRvIII突變的腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤具有顯著的定向殺傷作用，且安全性高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種T淋巴細(xì)胞、一種慢病毒、一種轉(zhuǎn)基因淋巴細(xì)胞、一種構(gòu)建體、一種用于治療癌癥的治療組合物和一種提高淋巴細(xì)胞活性和治療安全性的方法。

背景技術(shù)

腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是惡性度最高的腦瘤，占中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤的～81％，惡性膠質(zhì)瘤的發(fā)病率為3-6/10萬,每年中國因此病死亡人數(shù)為3萬人。惡性膠質(zhì)瘤呈浸潤性生長，與正常腦組織無明顯界限，并且多數(shù)不限于一個(gè)腦葉，呈指狀深入破壞腦組織，手術(shù)不可能完全切除。雖然母前采用了最為積極的治療手段，但中位生存期仍只有15個(gè)月，單獨(dú)使用放療，僅有不足1％的患者可以存活5年，即使新出現(xiàn)的放療與替莫唑胺(TMZ)化療的聯(lián)用方案，也只使近10％患者存活至5年以上。

由此可見，開發(fā)有效治療腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的方法尤為迫切.

發(fā)明內(nèi)容

本申請(qǐng)是基于發(fā)明人對(duì)以下事實(shí)和問題的發(fā)現(xiàn)和認(rèn)識(shí)作出的：

EGFR突變體EGFRvIII(EGFR胞外段的267個(gè)氨基酸被去除，其是由EGFR基因的第2～7個(gè)外顯子(275～1075位核苷酸)去除后的基因編碼的)在約30％的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中表達(dá)，但在正常組織中未檢測(cè)到，因此，EGFRvIII可代表膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的特異性突變。

基于上述發(fā)現(xiàn)，發(fā)明人提出了一種攜帶沉默細(xì)胞免疫檢查點(diǎn)的核酸分子和編碼無功能EGFR的核酸分子以及編碼嵌合抗原受體的核酸分子的構(gòu)建體和一種以此構(gòu)建體導(dǎo)入后形成的轉(zhuǎn)基因淋巴細(xì)胞，其編碼的嵌合抗原受體特異性結(jié)合抗原EGFRvIII。因此，本發(fā)明提出的構(gòu)建體和轉(zhuǎn)基因淋巴細(xì)胞用于腫瘤，尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的過繼T細(xì)胞的免疫治療，可以大大提高T淋巴細(xì)胞對(duì)腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的特異殺傷能力，且治療安全性顯著提高。

在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種T淋巴細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞免疫檢查點(diǎn)被沉默；表達(dá)無功能EGFR受體；以及表達(dá)嵌合抗原受體，其中，所述嵌合抗原受體包括：胞外區(qū)，所述胞外區(qū)包括單鏈抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述單鏈抗體特異性識(shí)別抗原EGFRvIII；跨膜區(qū)，所述跨膜區(qū)與所述胞外區(qū)相連，并且嵌入到所述T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞膜中；胞內(nèi)區(qū)，所述胞內(nèi)區(qū)與所述跨膜區(qū)相連，并且所述胞內(nèi)區(qū)包括CD28或4-1BB的胞內(nèi)段以及CD3ζ鏈。其中，細(xì)胞免疫檢查點(diǎn)包括細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)至少之一的免疫檢查點(diǎn)。無功能EGFR受體缺少N-端配體結(jié)合區(qū)和細(xì)胞內(nèi)受體酪氨酸激酶活性，但包括野生型EGFR受體的跨膜區(qū)和完整的與抗EGFR抗體結(jié)合的序列，無功能EGFR受體可作為淋巴細(xì)胞的自殺標(biāo)記。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，本發(fā)明實(shí)施例的T淋巴細(xì)胞具有抵抗腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的免疫抑制的特性，在體外的增殖能力、在腫瘤病人體內(nèi)的增殖和生存能力顯著提高，對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力顯著增強(qiáng)，尤其對(duì)EGFRvIII突變的腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤具有顯著的定向殺傷作用，安全性高。

在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了一種慢病毒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述慢病毒攜帶下列核酸分子：(a)編碼嵌合抗原受體的核酸分子，所述嵌合抗原受體具有SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列，所述編碼嵌合抗原受體的核酸分子具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；(b)沉默細(xì)胞免疫檢查點(diǎn)的核酸分子，所述沉默細(xì)胞免疫檢查點(diǎn)的核酸分子的核苷酸序列為選自SEQ ID NO：3～135的至少之一；以及(c)編碼無功能EGFR受體的核酸分子，所述無功能EGFR受體具有SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列，所述編碼無功能EGFR受體的核酸分子具有SEQ ID NO：137所示的核苷酸序列。