[發明專利]一種鼠尾藻多糖的提取方法

在審

• 申請號: 201610020085.9
• 申請日: 2016-01-13
• 公開（公告）號: CN105418788A
• 公開（公告）日: 2016-03-23
• 發明（設計）人: 羅巔輝;王昭晶;袁秀梅;曾亞威;聶開穎;李志明
• 申請（專利權）人: 華僑大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P35/00;A61P39/06
• 代理公司: 泉州市誠得知識產權代理事務所(普通合伙) 35209
• 代理人: 賴開慧

技術領域

本發明涉及海藻類多糖的提取技術領域，尤其涉及一種鼠尾藻多糖的提取方法。

背景技術

鼠尾藻隸屬圓子綱、墨角藻目、馬尾藻科、馬尾藻屬，生長在中潮帶巖石上或石沼中，廣泛分布于我國沿海地區，并可進行大面積養殖，原料豐富，被收載于《中國海洋藥物辭典》。因其具有軟堅散結、利尿消腫、清熱化痰之功效；同時具有較全面的營養價值，已被應用于醫藥、保健、水產養殖及化學工業等行業中，有許多可開發的潛力。

鼠尾藻富含鼠尾藻多糖，鼠尾藻多糖能促進人粒細胞超氧陰離子自由基的釋放，提高超氧化物歧化酶活性。目前關于鼠尾藻多糖提取方法的研究不多，主要采用的是熱水浸提法，該方法存在耗時、耗能、得率低等缺點。

發明內容

因此，針對以上內容，本發明提供一種鼠尾藻多糖的提取方法，解決現有技術中的提取方法耗時、耗能、得率低的問題。

為達到上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的：一種鼠尾藻多糖的提取方法，包括以下處理步驟，

a、恒溫水浴處理：將鼠尾藻和稀酸溶液以重量比為1：120，在恒溫水浴鍋97℃水浴200～220min，去除固體雜質，得到提取液，提取液用4mol/L的NaOH中和至pH=7.0；

b、提取液預處理：將提取液進行濃縮、冷卻至室溫，加4倍體積無水乙醇醇沉，置4℃冰箱過夜，離心棄上清，加蒸餾水溶解沉淀，對得到的溶液反復凍融，離心除雜，冷凍條件為-20℃，溶解條件為50℃，重復7次，然后采用冷凍干燥機干燥，得到粗品1；

c、粗品1脫蛋白：粗品1按重量比1:25溶于蒸餾水，得到糖液，然后加入糖液總體積1/4體積的sevage試劑，充分震蕩3h，離心取上層糖液，重復12次；對糖液凍融，離心除去雜質，冷凍條件為-20℃，溶解條件為50℃，重復5次，然后采用冷凍干燥機干燥，得到粗品2；

d、對得到的粗品2進行分離純化。

進一步的，步驟a的稀酸溶液為鹽酸。

進一步的，步驟b總采用旋轉蒸發儀進行濃縮，所述旋轉蒸發儀的溫度控制在70～75℃。

進一步的，步驟c所述的sevage試劑為氯仿與正丁醇按重量比4:1混合而成。

進一步的，步驟d的分離純化方法具體為：（1）凝膠的預處理：將凝膠置于真空干燥器中，連接循環水式真空泵，進行間歇抽真空，抽氣30～35分鐘，休息5-10分鐘，并用玻璃棒攪拌，使其松散，使凝膠里的氣體可以全部抽出；（2）裝柱與平衡：將層析柱夾持在鐵架臺上，保持垂直，從柱頂端倒入平衡緩沖液，待氣泡排除后，使蒸餾水在柱內保持3～5cm高度，關閉柱出口，用玻璃棒輕輕攪勻凝膠懸浮液，待凝膠沉淀，打開恒流泵，調節流速在60～65mL/h，用2000～2100mL的蒸餾水平衡，使之緊密結實；（3）上樣檢測與收集：取500mg粗品2溶于10mL蒸餾水，將柱上層緩沖液吸出與凝膠表層持平后，吸取樣品溶液沿層析柱內壁同一方向旋轉緩慢加入，使樣品在膠柱表面分布均勻；加完后，打開恒流泵，使樣液進入柱體，待柱體上表面剩余1～2mm樣液時，沿層析柱內壁同一方向，旋轉緩慢加入蒸餾水，將壁上的粘著液洗下，然后繼續按此方法加入蒸餾水至距膠柱上表面約8cm高度；封蓋柱體，調節流速60～65ml/h，先后分別用蒸餾水洗脫、1mol/LNaCl線性梯度洗脫；設定12min收集一管，每管12ml，自動部分收集器收集100管；用苯酚-硫酸法測定糖含量分布情況，用紫外分光光度法測定蛋白質含量分布情況，記錄數據并制作洗脫分布圖，根據波峰范圍部分收集洗脫液；用截留分子量3500的透析袋對收集液自來水流水透析24h,然后蒸餾水透析24h,透析完成后進行旋轉蒸發濃縮，冷凍干燥機凍干，即得到鼠尾藻多糖。

通過采用前述技術方案，本發明的有益效果是：本發明的鼠尾藻多糖的提取方法，包括將鼠尾藻與稀酸混溶恒溫水浴，得到提取液，對提取液進行預處理得到粗品1，再對粗品1進行脫蛋白得到粗品2，然后分離純化，上述方法提取鼠尾藻多糖不耗時，節能，且多糖的得率高，提取的多糖具有較強的抗氧化活性和癌細胞生長抑制作用。

具體實施方式

以下將結合具體實施例來詳細說明本發明的實施方式，借此對本發明如何應用技術手段來解決技術問題，并達成技術效果的實現過程能充分理解并據以實施。

若未特別指明，實施例中所采用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段，所采用的試劑和產品也均為可商業獲得的。所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標明。

本發明的實施例為：