[發明專利]一種鼠尾藻多糖的提取方法

在審

• 申請號: 201610020085.9
• 申請日: 2016-01-13
• 公開（公告）號: CN105418788A
• 公開（公告）日: 2016-03-23
• 發明（設計）人: 羅巔輝;王昭晶;袁秀梅;曾亞威;聶開穎;李志明
• 申請（專利權）人: 華僑大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P35/00;A61P39/06
• 代理公司: 泉州市誠得知識產權代理事務所(普通合伙) 35209
• 代理人: 賴開慧

1.一種鼠尾藻多糖的提取方法，其特征在于：包括以下處理步驟，

a、恒溫水浴處理：將鼠尾藻和稀酸溶液以重量比為1：120，在恒溫水浴鍋97℃水浴200～220min，去除固體雜質，得到提取液，提取液用4mol/L的NaOH中和至pH=7.0；

b、提取液預處理：將提取液進行濃縮、冷卻至室溫，加4倍體積無水乙醇醇沉，置4℃冰箱過夜，離心棄上清，加蒸餾水溶解沉淀，對得到的溶液反復凍融，離心除雜，冷凍條件為-20℃，溶解條件為50℃，重復7次，然后采用冷凍干燥機干燥，得到粗品1；

c、粗品1脫蛋白：粗品1按重量比1:25溶于蒸餾水，得到糖液，然后加入糖液總體積1/4體積的sevage試劑，充分震蕩3h，離心取上層糖液，重復12次；對糖液凍融，離心除去雜質，冷凍條件為-20℃，溶解條件為50℃，重復5次，然后采用冷凍干燥機干燥，得到粗品2；

d、對得到的粗品2進行分離純化。

2.根據權利要求1所述的鼠尾藻多糖的提取方法，其特征在于：步驟a的稀酸溶液為鹽酸。

3.根據權利要求1或2所述的鼠尾藻多糖的提取方法，其特征在于：步驟b總采用旋轉蒸發儀進行濃縮，所述旋轉蒸發儀的溫度控制在70～75℃。

4.根據權利要求3所述的鼠尾藻多糖的提取方法，其特征在于：步驟c所述的sevage試劑為氯仿與正丁醇按重量比4:1混合而成。

5.根據權利要求4所述的鼠尾藻多糖的提取方法，其特征在于：步驟d的分離純化方法具體為：（1）凝膠的預處理：將凝膠置于真空干燥器中，連接循環水式真空泵，進行間歇抽真空，抽氣30～35分鐘，休息5-10分鐘，并用玻璃棒攪拌，使其松散，使凝膠里的氣體可以全部抽出；（2）裝柱與平衡：將層析柱夾持在鐵架臺上，保持垂直，從柱頂端倒入平衡緩沖液，待氣泡排除后，使蒸餾水在柱內保持3～5cm高度，關閉柱出口，用玻璃棒輕輕攪勻凝膠懸浮液，待凝膠沉淀，打開恒流泵，調節流速在60～65mL/h，用2000～2100mL的蒸餾水平衡，使之緊密結實；（3）上樣檢測與收集：取500mg粗品2溶于10mL蒸餾水，將柱上層緩沖液吸出與凝膠表層持平后，吸取樣品溶液沿層析柱內壁同一方向旋轉緩慢加入，使樣品在膠柱表面分布均勻；加完后，打開恒流泵，使樣液進入柱體，待柱體上表面剩余1～2mm樣液時，沿層析柱內壁同一方向，旋轉緩慢加入蒸餾水，將壁上的粘著液洗下，然后繼續按此方法加入蒸餾水至距膠柱上表面約8cm高度；封蓋柱體，調節流速60～65ml/h，先后分別用蒸餾水洗脫、1mol/LNaCl線性梯度洗脫；設定12min收集一管，每管12ml，自動部分收集器收集100管；用苯酚-硫酸法測定糖含量分布情況，用紫外分光光度法測定蛋白質含量分布情況，記錄數據并制作洗脫分布圖，根據波峰范圍部分收集洗脫液；用截留分子量3500的透析袋對收集液自來水流水透析24h,然后蒸餾水透析24h,透析完成后進行旋轉蒸發濃縮，冷凍干燥機凍干，即得到鼠尾藻多糖。