[發(fā)明專(zhuān)利]藍(lán)莓莖尖干燥冷凍組培脫毒育苗培養(yǎng)基及脫毒育苗方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610018907.X
• 申請(qǐng)日: 2016-01-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105532470B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡恒康;張啟香;李紅波;張林華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇斯耐歐農(nóng)林科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/04
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 杭州求是專(zhuān)利事務(wù)所有限公司33200
• 代理人: 周烽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組培脫毒育苗技術(shù)，具體是涉及一種以藍(lán)莓莖尖為外植體，干燥結(jié)合冷凍脫毒組培育苗培養(yǎng)基以及脫毒育苗方法。

背景技術(shù)

藍(lán)莓原產(chǎn)北美，屬于杜鵑花科(Ericaceae)越橘屬(Vaccinium spp.)為多年生落葉或常綠灌木，果實(shí)富含花色苷等抗氧化物質(zhì)，具有改善視力、抗氧化、抗癌及延緩腦神經(jīng)衰老等保健功能，被國(guó)際糧農(nóng)組織列為人類(lèi)五大健康食品之一，同時(shí)也被譽(yù)為“漿果之王”。

我國(guó)藍(lán)莓引種栽培研究始于20世紀(jì)末,近年來(lái)栽培面積正快速增加，但果農(nóng)對(duì)病毒病害的發(fā)生發(fā)展缺乏認(rèn)知和防治經(jīng)驗(yàn)，從而存在病毒病害快速傳播而后嚴(yán)重暴發(fā)的巨大潛在危險(xiǎn)。藍(lán)莓病毒病害常引起葉片褪綠、畸形、脫落、黃化或斑駁，花瓣變紅或枯萎，莖部畸形彎曲、表皮形成紅色條紋或發(fā)生頂梢枯死，樹(shù)體矮化、減產(chǎn)或死亡等癥狀，嚴(yán)重時(shí)減產(chǎn)，甚至絕產(chǎn)。目前，已發(fā)現(xiàn)10余種侵染藍(lán)莓的病毒，尤其以藍(lán)莓休克病毒(Blueberry shock virus,BlShV)、藍(lán)莓鞋帶病毒(Blueberry shoestring virus，BBSSV)、藍(lán)莓枯萎病毒(Blueberry scorch virus，BLSCV)等危害為主。其中，藍(lán)莓休克病毒為目前危害藍(lán)莓最嚴(yán)重的病毒之一。BlShV病毒可通過(guò)蜜蜂攜帶感染的花粉傳播，幾乎侵染所有的藍(lán)莓品種，并表現(xiàn)相似的癥狀。據(jù)統(tǒng)計(jì)，BlShV侵染藍(lán)莓造成的損失可高達(dá)34％～90％。截止目前，還沒(méi)有任何針對(duì)病毒病的有效藥物，只以預(yù)防為主，其中無(wú)病毒種苗培育為最關(guān)鍵的措施之一。

為避免病毒給生產(chǎn)帶來(lái)的巨大危害，實(shí)現(xiàn)藍(lán)莓的無(wú)病毒苗栽培是目前我國(guó)藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的必經(jīng)之路。目前，無(wú)病毒苗主要通過(guò)熱處理脫毒法、莖尖脫毒法、花藥培養(yǎng)法、微莖尖嫁接脫毒法、愈傷組織培養(yǎng)法和抗病毒劑法等生物技術(shù)方法獲取，其中熱處理結(jié)合莖尖脫毒法運(yùn)用最為廣泛，然而此法與新興的莖尖低溫結(jié)合超低溫脫毒法相比，仍存在操作難度大、耗時(shí)長(zhǎng)以及脫毒率偏低等明顯缺點(diǎn)。莖尖超低溫脫毒法是一種新型高效脫除植物病毒的新技術(shù)，已在馬鈴薯、柑桔、葡萄、櫻桃、草莓、甘薯等植物上進(jìn)行研究并取得了一定成果，被認(rèn)為是目前最有效脫除植物病毒的方法之一，冷凍脫毒法中分為快速冷凍法、慢速冷凍法、分步冷凍法、干燥冷凍法等，其中快速冷凍法、慢速冷凍法需要昂貴精密的培養(yǎng)箱，且對(duì)梯度溫度控制難度較大，干燥冷凍法僅需采用干燥器控制材料脫水速度和脫水程度，操作簡(jiǎn)便，周期短。

經(jīng)檢索，尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)藍(lán)莓組培苗脫毒方面的資料報(bào)道。因此，研發(fā)藍(lán)莓莖尖干燥冷凍脫毒組培育苗技術(shù)，不但為藍(lán)莓，還為木本果樹(shù)組培脫毒育苗開(kāi)劈了一條新途徑或借鑒之路。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)藍(lán)莓的經(jīng)濟(jì)價(jià)值越來(lái)越被人們認(rèn)識(shí)，發(fā)展藍(lán)莓生產(chǎn)的熱情高漲，依靠傳統(tǒng)的扦插育苗和組培育苗，從數(shù)量和質(zhì)量上均無(wú)法滿(mǎn)足現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)的需求，為此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種以藍(lán)莓莖尖為外植體，干燥冷凍組培脫毒育苗培養(yǎng)基及脫毒育苗方法。

本發(fā)明的技術(shù)問(wèn)題通過(guò)如下技術(shù)方案解決：

本藍(lán)莓莖尖干燥冷凍組培脫毒育苗培養(yǎng)基，包括不同誘導(dǎo)時(shí)期的五種培養(yǎng)基，各種培養(yǎng)基的原料及其附加量分別是：

(1)超低溫預(yù)培養(yǎng)基：WPM培養(yǎng)基+20ml·L^-1甘油+136.8g·L^-1蔗糖，pH5.2；

(2)超低溫培養(yǎng)基：WPM培養(yǎng)基+300ml·L^-1甘油+150ml·L^-1乙二醇+150ml·L^-1二甲基亞楓即DMSO+136.8g·L^-1蔗糖，pH5.2；

(3)恢復(fù)培養(yǎng)基：WPM培養(yǎng)基+0.1mg·L^-1玉米素即ZT+0.1mg·L^-11-萘乙酸即NAA+0.1mg·L^-1赤霉素即GA₃+8.0g·L^-1瓊脂粉+30g·L^-1蔗糖，pH5.2；

(4)芽增殖誘導(dǎo)培養(yǎng)基：WPM培養(yǎng)基+0.5mg·L^-1ZT+0.1mg·L^-1NAA+0.1mg·L^-1GA₃+8.0g·L^-1瓊脂粉+30g·L^-1蔗糖，pH5.2；