[發(fā)明專利]防治核桃炭疽病的生防菌株及其篩選方法與應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610018791.X
• 申請日: 2016-01-13
• 公開（公告）號: CN105567573A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓長志;霍超
• 申請（專利權(quán)）人: 西南林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P3/00;C12R1/885
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 鄭自群

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于防治核桃炭疽病的生防菌株技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種防治核桃 炭疽病的真菌生防菌株及其篩選方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

近些年隨著云南省政府大力發(fā)展核桃種植，各地依托當(dāng)?shù)貎?yōu)勢資源積極發(fā) 展核桃產(chǎn)業(yè)。該省的核桃生產(chǎn)在全國核桃生產(chǎn)中占有非常重要的地位，其核桃 的栽培面積和產(chǎn)量約占全國的1/3，作為云南省重要的木本油料植物，核桃在改 善當(dāng)?shù)厝藗兩钏剑岣呱鐣б娣矫姘l(fā)揮著重要作用。大理州漾濞彝族自 治縣作為云南省五個(gè)“全國經(jīng)濟(jì)林核桃之鄉(xiāng)”之一，其種植核桃具有較為悠久 的歷史，核桃產(chǎn)量、品質(zhì)均居云南省首位。然而，核桃炭疽病作為近幾年來核 桃上的重要真菌病害，嚴(yán)重危害著當(dāng)?shù)睾颂耶a(chǎn)業(yè)的健康、有序、快速發(fā)展。據(jù) 近些年對漾濞核桃產(chǎn)區(qū)核桃炭疽病的病害調(diào)查結(jié)果，嚴(yán)重年份該病發(fā)生率高達(dá) 90％以上，對當(dāng)?shù)睾颂业纳a(chǎn)造成較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

限于生產(chǎn)上對于該病害的防治措施主要依賴于化學(xué)藥劑，而病原菌抗藥性 逐年顯現(xiàn)，急需開發(fā)適合生產(chǎn)的優(yōu)良藥劑。目前，學(xué)術(shù)界對于化學(xué)藥劑的替代 品生防菌的研究逐年增加，對生防菌的篩選工作多集中于對農(nóng)作物、蔬菜等方 面的報(bào)道上。就核桃炭疽病的生防菌篩選而言，王清海,牛贍光,劉幸紅,等.核 桃炭疽病高效生防菌株鑒定及抑菌活性[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2011,(3):335-337報(bào)道了研究發(fā)現(xiàn)短芽孢桿菌PF-2對該菌的抑菌率最高，為 88.47％，還有三株均屬于芽孢桿菌屬的細(xì)菌也對核桃炭疽病菌具有83％以上的 抑菌率，盡管如此，對于可作為核桃炭疽病的生防真菌的研究尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有核桃炭疽病防治主要依賴化學(xué)藥劑的問題，本發(fā)明提出一種防 治核桃炭疽病的生防菌株，該生防菌株為真菌，其對核桃炭疽病菌均有80％以 上的抑菌活性，并且穩(wěn)定性好。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種防治核桃炭疽病的生防菌株，為鉤狀木霉(Trichodermahamatum) YB-4-15，保藏單位：中國微生物菌株保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱： CGMCC，保藏日期：2015-12-07，保藏號：CGMCCNo.11809。

進(jìn)一步，所述生防菌株菌絲對光照條件不敏感，孢子產(chǎn)生需要光照條件。

進(jìn)一步，所述生防菌株菌絲生長的適宜溫度為12-28℃，適宜pH值為4-8。

進(jìn)一步，所述生防菌株生長的培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種防治核桃炭疽病的生防菌株的篩選方法， 包括以下步驟：

1)土壤微生物分離及指示菌株

選擇大理州漾濞縣光明村發(fā)病不同的核桃植株根際土壤，鏟去表土層，取 10-15cm處土樣，采用土壤稀釋平板法進(jìn)行分離，28℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3d (天)后，純化長出的菌株，再將純化菌株放入4℃冰箱保存?zhèn)溆茫恢甘揪隇? 膠孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)；

2)生防菌株篩選

初篩：將步驟1)的土壤純化菌株以及指示菌株接種于PDA平板進(jìn)行活化， 采用平板對峙培養(yǎng)法進(jìn)行篩選，即將一塊直徑為6mm的指示菌株置于PDA平 板中央，在距中央一定距離的圓周上等距離接4塊直徑為6mm土壤純化菌株， 記錄指示菌株直徑，篩選出效果較好的菌株得到初篩菌株；

復(fù)篩：一塊指示菌株置于PDA平板中央，在距中央一定距離的圓周上等距 離接2塊初篩菌株，篩選出對指示菌株抑制作用效果明顯、穩(wěn)定的生防菌株。

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種防治核桃炭疽病的生防菌株在制備防治核 桃炭疽病菌劑方面的應(yīng)用，將生防菌株接種于含牛肉浸膏的馬鈴薯葡萄糖液體 培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，將發(fā)酵液進(jìn)行離心，上清液用細(xì)菌過濾器過濾，即得無菌 濾液菌劑。

進(jìn)一步，所述牛肉浸膏的含量的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.5％。

進(jìn)一步，所述發(fā)酵溫度為28℃，所述液體培養(yǎng)基的pH值為7。

進(jìn)一步，所述無菌濾液菌劑抑菌處理溫度為12-45℃。

進(jìn)一步，所述無菌濾液菌劑抑菌處理溫度為28-30℃。

本發(fā)明的有益效果：