[發(fā)明專利]防治核桃炭疽病的生防菌株及其篩選方法與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610018791.X
• 申請(qǐng)日: 2016-01-13
• 公開（公告）號(hào): CN105567573A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓長(zhǎng)志;霍超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西南林業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;A01N63/04;A01P3/00;C12R1/885
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 鄭自群

1.一種防治核桃炭疽病的生防菌株，其特征在于，所述生防菌株為鉤狀木 霉(Trichodermahamatum)YB-4-15，保藏號(hào)為：CGMCCNo.11809。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治核桃炭疽病的生防菌株，其特征在于，所述 生防菌株的菌絲對(duì)光照條件不敏感，孢子產(chǎn)生需要光照條件。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的防治核桃炭疽病的生防菌株，其特征在于， 所述生防菌株菌絲生長(zhǎng)的適宜溫度為12-28℃，適宜pH值為4-8。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治核桃炭疽病的生防菌株，其特征在于，所述 生防菌株生長(zhǎng)的培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。

5.一種如權(quán)利要求1所述的防治核桃炭疽病的生防菌株的篩選方法，其特 征在于，包括以下步驟：

1)土壤微生物分離及指示菌株

選擇大理州漾濞縣光明村發(fā)病不同的核桃植株根際土壤，鏟去表土層，取 10-15cm處土樣，采用土壤稀釋平板法進(jìn)行分離，所述平板為PDA平板，28℃ 的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3d后，純化長(zhǎng)出的菌株，再將純化菌株放入4℃冰箱保存 備用；指示菌株為膠孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)；

2)生防菌株篩選

初篩：將步驟1)的土壤純化菌株以及指示菌株接種于PDA平板進(jìn)行活化， 采用平板對(duì)峙培養(yǎng)法進(jìn)行篩選，即將一塊直徑為6mm指示菌株置于PDA平板 中央，在距中央一定距離的圓周上等距離接4塊直徑為6mm土壤純化菌株，記 錄指示菌株生長(zhǎng)直徑，篩選出效果較好的菌株得到初篩菌株；

復(fù)篩：一塊指示菌株置于PDA平板中央，在距中央一定距離的圓周上等距 離接2塊初篩菌株，篩選出對(duì)指示菌株抑菌作用效果明顯、穩(wěn)定的生防菌株。

6.一種如權(quán)利要求1所述的防治核桃炭疽病的生防菌株在制備防治核桃炭 疽病菌劑方面的應(yīng)用，其特征在于，將生防菌株接種于含牛肉浸膏的馬鈴薯葡 萄糖液體培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，將發(fā)酵液進(jìn)行離心，上清液用細(xì)菌過濾器過濾， 即得無菌濾液菌劑。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的防治核桃炭疽病的生防菌株在制備防治核桃炭疽 病菌劑方面的應(yīng)用，其特征在于，所述牛肉浸膏的含量的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.5％。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的防治核桃炭疽病的生防菌株在制備防治核桃 炭疽病菌劑方面的應(yīng)用，其特征在于，所述發(fā)酵溫度為28℃，所述液體培養(yǎng)基 的pH值為7。

9.根據(jù)權(quán)要求6或7所述的防治核桃炭疽病的生防菌株在制備防治核桃炭 疽病菌劑方面的應(yīng)用，其特征在于，所述無菌濾液菌劑抑菌處理溫度為12-45℃。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的防治核桃炭疽病的生防菌株在制備防治核桃炭 疽病菌劑方面的應(yīng)用，其特征在于，所述無菌濾液菌劑抑菌處理溫度為28-30℃。