[發明專利]一種印度芥菜的組織培養方法

在審

• 申請號: 201610018410.8
• 申請日: 2016-01-12
• 公開（公告）號: CN105505982A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發明（設計）人: 張龍
• 申請（專利權）人: 麗水學院
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 張健

1.一種印度芥菜的組織培養方法，其特征在于，包括如下步驟：

a將印度芥菜種子用蒸餾水浸泡5h，然后放入5-10％次氯酸鈉溶液消毒 10-20min，將次氯酸鈉溶液放入廢液罐，用無菌水清洗種子3-5次，然后將種子 和經高壓滅菌過的沙子按體積比1:4-5混合，放入4℃冰箱，低溫破休眠10-20天；

b然后將破休眠后芥菜種子播入培養基質；

c將印度芥菜地上部分取回組培室，用流水沖洗0.5-1h，去掉地上部分表面的 灰塵、泥沙和微生物；

d將印度芥菜地上部分放入超凈工作臺，用70-75％酒精消毒40-60s，再用 0.1％-0.15％升汞消毒10-20min，將升汞溶液放到廢液缸，然后用無菌水清洗地上 部分8-10次，使殘留在植株上的升汞和酒精洗掉；

e用解剖刀取0.5-1cm長莖尖放在培養基上，誘導印度芥菜愈傷的生成；

f將印度芥菜愈傷組織挑出，放入已轉入目的基因的農桿菌懸浮液侵染5分 鐘；將愈傷組織取出，置于無菌的濾紙上瀝干20min；將愈傷組織置于培養基上 繼續培養、篩選；

g將印度芥菜愈傷組織轉到分化培養基上進行誘芽培養；

h將印度芥菜壯苗轉接到生根培養基上進行生根培養；

i將組培瓶瓶蓋打開，將試管苗放在室內培養3天，然后將試管苗取出組培瓶， 洗掉根系上培養基，定植到步驟b的基質中，在溫室內進行馴化煉苗培養10天， 既得印度芥菜組培苗。

2.根據權利要求1所述的一種印度芥菜的組織培養方法，其特征在于， 步驟b中培養基質由蛭石、珍珠巖、草炭按照1:1:3的重量比混合組成。

3.根據權利要求1所述的一種印度芥菜的組織培養方法，其特征在于， 步驟e中培養基由1/2MS基本培養基+3％蔗糖+0.7％瓊脂+0.8-1.2mg/L NAA+0.3-0.5mg/L6-BA組成。

4.根據權利要求1所述的一種印度芥菜的組織培養方法，其特征在于， 步驟g中培養基由MS基本培養基+3％蔗糖+0.7％瓊脂+0.1-0.2mg/LNAA+1-2 mg/L6-BA組成。

5.根據權利要求1所述的一種印度芥菜的組織培養方法，其特征在于， 步驟h中培養基由MS基本培養基+3％蔗糖+0.7％瓊脂+3.5-4mg/LNAA組成。