[發(fā)明專(zhuān)利]一種印度芥菜的組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610018410.8
• 申請(qǐng)日: 2016-01-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105505982A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張龍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 麗水學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/82
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00
• 代理公司: 杭州浙科專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 33213
• 代理人: 張健

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種組織培養(yǎng)的方法，具體涉及一種印度芥菜的組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

印度芥菜(BrassicajunceaL.)是一種高產(chǎn)、生長(zhǎng)快的雙二倍體十字花科植 物,染色體條數(shù)為2n＝36。目前，我們國(guó)家對(duì)該領(lǐng)域的研究還是空白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的空白，提供一種印度芥菜的組織 培養(yǎng)方法

解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是一種印度芥菜的組織培養(yǎng)方法，包括 如下步驟：

a將印度芥菜種子用蒸餾水浸泡5h，然后放入5-10％次氯酸鈉溶液消毒 10-20min，將次氯酸鈉溶液放入廢液罐，用無(wú)菌水清洗種子3-5次，然后將種子 和經(jīng)高壓滅菌過(guò)的沙子按體積比1:4-5混合，放入4℃冰箱，低溫破休眠10-20 天；

b然后將破休眠后芥菜種子播入培養(yǎng)基質(zhì)；

c將印度芥菜地上部分取回組培室，用流水沖洗0.5-1h，去掉地上部分表面 的灰塵、泥沙和微生物；

d將印度芥菜地上部分放入超凈工作臺(tái)，用70-75％酒精消毒40-60s，再用 0.1％-0.15％升汞消毒10-20min，將升汞溶液放到廢液缸，然后用無(wú)菌水清洗地上 部分8-10次，使殘留在植株上的升汞和酒精洗掉；

e用解剖刀取0.5-1cm長(zhǎng)莖尖放在培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)印度芥菜愈傷的生成；

f將印度芥菜愈傷組織挑出，放入已轉(zhuǎn)入目的基因的農(nóng)桿菌懸浮液侵染5分 鐘；將愈傷組織取出，置于無(wú)菌的濾紙上瀝干20min；將愈傷組織置于培養(yǎng)基上 繼續(xù)培養(yǎng)、篩選；

g將印度芥菜愈傷組織轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基上進(jìn)行誘芽培養(yǎng)；

h將印度芥菜壯苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)；

i將組培瓶瓶蓋打開(kāi)，將試管苗放在室內(nèi)培養(yǎng)3天，然后將試管苗取出組培 瓶，洗掉根系上培養(yǎng)基，定植到步驟b的基質(zhì)中，在溫室內(nèi)進(jìn)行馴化煉苗培養(yǎng)10 天，既得印度芥菜組培苗。

印度芥菜(Brassicajuncea)對(duì)Cd、Pb、Zn等具有較強(qiáng)的抗耐性和富集 能力，是目前篩選出的一種生長(zhǎng)快、生物量大的土壤Pb、Cd、Zn的富集植物, 印度芥菜生長(zhǎng)速率和地上部生物量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于遏藍(lán)菜，因此相同條件下印度芥菜對(duì) Cd等重金屬的吸收總量高于遏藍(lán)菜，在植物修復(fù)中具有更大的潛力.印度芥菜成 為植物重金屬吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)理機(jī)制研究，以及轉(zhuǎn)基因研究的重要材料。通過(guò)本發(fā) 明對(duì)印度芥菜愈傷組織的誘導(dǎo)以及分化培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，可以為轉(zhuǎn)基因、重金屬 轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究提供基礎(chǔ)材料。

附圖說(shuō)明

圖1是NAA和6-BA激素配方對(duì)愈傷組織平均誘導(dǎo)率的影響；

圖2是NAA濃度對(duì)無(wú)根苗平均生根率的影響。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。

本發(fā)明公開(kāi)一種印度芥菜的組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟：

a將印度芥菜種子用蒸餾水浸泡5h，然后放入5-10％次氯酸鈉溶液消毒 10-20min，將次氯酸鈉溶液放入廢液罐，用無(wú)菌水清洗種子3-5次，然后將種子 和經(jīng)高壓滅菌過(guò)的沙子按體積比1:4-5混合，放入4℃冰箱，低溫破休眠10-20 天；

b然后將破休眠后芥菜種子播入培養(yǎng)基質(zhì)；

c將印度芥菜地上部分取回組培室，用流水沖洗0.5-1h，去掉地上部分表面 的灰塵、泥沙和微生物；

d將印度芥菜地上部分放入超凈工作臺(tái)，用70-75％酒精消毒40-60s，再用 0.1％-0.15％升汞消毒10-20min，將升汞溶液放到廢液缸，然后用無(wú)菌水清洗地上 部分8-10次，使殘留在植株上的升汞和酒精洗掉；

e用解剖刀取0.5-1cm長(zhǎng)莖尖放在培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)印度芥菜愈傷的生成；

f將印度芥菜愈傷組織挑出，放入已轉(zhuǎn)入目的基因的農(nóng)桿菌懸浮液侵染5分 鐘；將愈傷組織取出，置于無(wú)菌的濾紙上瀝干20min；將愈傷組織置于培養(yǎng)基上 繼續(xù)培養(yǎng)、篩選；

g將印度芥菜愈傷組織轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基上進(jìn)行誘芽培養(yǎng)；

h將印度芥菜壯苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)；

i將組培瓶瓶蓋打開(kāi)，將試管苗放在室內(nèi)培養(yǎng)3天，然后將試管苗取出組培 瓶，洗掉根系上培養(yǎng)基，定植到步驟b的基質(zhì)中，在溫室內(nèi)進(jìn)行馴化煉苗培養(yǎng)10 天，既得印度芥菜組培苗。