[發明專利]重組人血白蛋白的液體制劑在審

申請號：	201610017874.7	申請日：	2016-01-13
公開（公告）號：	CN106963942A	公開（公告）日：	2017-07-21
發明（設計）人：	段寶玲;王志明;王雪	申請（專利權）人：	華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司
主分類號：	A61K38/38	分類號：	A61K38/38;A61K9/08;A61K47/02;A61K47/26;A61K47/12;A61P1/16;A61P7/10;A61P7/00;A61P7/08;C12N5/00
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地址：	050015 河北***	國省代碼：	河北;13
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摘要：
搜索關鍵詞：	重組人血白蛋白液體制劑
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【說明書】：

技術領域

本發明公開了一種重組人血白蛋白的液體制劑，屬于生物制劑技術領域。

背景技術

人血白蛋白（HSA）是存在于人循環系統中的最普遍的血液蛋白，由585個氨基酸組成，分子量為66kD。它在人體內承擔著相當大的作用，如具有維持血液滲透壓和攜帶血液中多種配基（包括氨基酸，脂肪酸，金屬離子，類固醇及藥物）與組織進行交換等生理功能。

在臨床上，人血白蛋白被用于低蛋白血癥、胎兒紅細胞增多癥、各種原因引起的出血性休克及肝硬化腹水等的治療。另外人血白蛋白還被用作藥物賦形劑、穩定劑以及細胞培養添加劑。在過去的幾十年間，由于人血白蛋白的廣泛應用，其需求量變得非常巨大，總需求量超過500噸/年。

盡管已經在提取工藝上取得了巨大的進步，但傳統血漿來源的人血白蛋白還是遠遠不能滿足現在的市場需求。而且由于血液中存在各種傳染性疾病病原體的潛在危險，尤其是艾滋病、乙肝等病毒的傳播，來自人源血漿的白蛋白在純化過程中難免將這些病毒帶入終產品。基于上述原因，利用基因重組技術生產的重組人血白蛋白（rHSA）既可避免病原體感染；同時可以解決血液供應有限的難題。

重組蛋白藥物產品本身是一個復雜的大分子結構，經過蛋白質復雜的翻譯后加工與修飾，形成具有高度特異性的三、四維結構，如重組人血白蛋白就是由585個氨基酸折疊成三螺旋結構域的多肽鏈，分子中含有35個半胱氨酸和17個二硫鍵。rHSA與其他任何蛋白質一樣，其生物學活性如其結合親和性或者中和活性依賴至少核心氨基酸序列的構象完整性，同時需要保護蛋白質的多個功能集團保持穩定。

化學和物理不穩定性均可導致蛋白質變性。因為蛋白質藥物比傳統的有機和無機藥物更大且更復雜，因此這種重組蛋白藥物的制劑會出現特殊問題。蛋白質的穩定性可以受到多種因素影響，包括離子強度、pH、溫度、重復冷凍/解凍循環、蛋白質濃度和剪切力。蛋白質的活性可以由于物理不穩定性和化學不穩定性而喪失，物理不穩定性包括變性、聚集(可溶及不可溶聚集體形成)、沉淀與吸附；化學不穩定性包括外消旋化、β-消除或者二硫鍵交換、水解、脫酰胺作用和氧化等等。這些不穩定性均可能導致生物學活性的降低、毒性和/或免疫原性的增加，蛋白質副產物或者衍生物的形成。因此，提供一種能穩定保存重組人血白蛋白，并適合于實際臨床使用的制劑處方是很有意義的。

雖然現有技術領域指出了可適用于生產特定蛋白質制劑的許多制劑輔料，但是不能預測為了克服特定蛋白質可能具有的特定的不穩定性問題而應該加入哪些輔料以及應該加入的量。因此找尋用于配制rHSA制劑的合適輔料和最佳條件充滿了挑戰。

發明內容

為了解決上述問題，本發明的申請人進行了大量的實驗，對可以用于rHSA制劑的輔料的類型和用量進行了大量的篩選，公開的rHSA液體制劑能夠充分防止重組人血白蛋白的聚集、降解、氧化和變性等，具有使重組人血白蛋白長時間保持穩定，保持其生物學活性，方便于臨床使用，從而達到了本發明的目的。

為達到上述發明目的，本發明采用的技術方案為：

一種重組人血白蛋白的液體制劑，所述液體制劑主要成分為：重組人血白蛋白、等滲調節劑、蛋白保護劑和蛋白熱穩定劑，pH6.4~7.4。

所述的重組人血白蛋白濃度為100~250g/L。

所述的等滲調節劑為氯化鈉，濃度為100~150mmol/L。

所述的蛋白保護劑為吐溫80或吐溫20，濃度為10~50mg/L。

所述的蛋白熱穩定劑為辛酸鈉，濃度為0.14~0.18mmol/L。

所述的重組人血白蛋白的液體制劑優選為，由100～250g/L重組人血白蛋白、115mmol/L氯化鈉、15mg/L 吐溫80、0.16mmol/L辛酸鈉組成，pH值為7.0。

本發明公開的制劑可以使重組人血白蛋白在2～8℃條件下至少2年保持穩定。

本發明公開的液體制劑的制備方法，包括以下步驟：