[發(fā)明專利]適用于時間分辨熒光免疫法的加樣方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610016466.X
• 申請日: 2016-01-08
• 公開（公告）號: CN105445451B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳建起;鮑冬芹;譚玉華
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州市豐華生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司44202
• 代理人: 郝傳鑫,宋靜娜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于時間分辨熒光免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及適用于時間分辨熒光免疫法的加樣方法。

背景技術(shù)

時間分辨熒光免疫分析法測定樣本中物質(zhì)的含量時，其步驟通常包括：

1)加樣：在容器中將標(biāo)記物與緩沖液混合均勻，配制標(biāo)記物工作液；然后將樣本加入固相載體包被反應(yīng)板中，向每孔中加入配制好的標(biāo)記物工作液；

2)反應(yīng)板在室溫下，緩慢振蕩孵育；

3)用上述的工作洗滌液洗板，拍干；

4)向每孔中加入增強液；將抗體固相載體于室溫下緩慢振蕩后檢測。

其中，第一步的加樣方法至關(guān)重要，影響著測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。對于目前的加樣方法來說，為了使標(biāo)記物充分與樣本的待測物質(zhì)結(jié)合，盡可能提高樣本的分析準(zhǔn)確性，通常將標(biāo)記物通過緩沖液稀釋至較低濃度，然后向固相載體包被反應(yīng)板加入多于100μL體積的標(biāo)記物工作液。

這種的操作方法由于多種試劑均需要由操作者在每次檢測前配制，必須增加因加樣引起的誤差和由于操作者不同操作或操作批次不同所造成的誤差。另一方面，由于參與反應(yīng)的各種試劑及緩沖液之間常常會發(fā)生某種化學(xué)反應(yīng)，或者是某些試劑與緩沖液配制到說明書要求的工作濃度后，影響測定結(jié)果的穩(wěn)定性，因此不能在操作前將待加樣試劑和緩沖試劑混合保存。同時，由于引入了一個中間容器，這樣的加樣方法不但操作繁瑣，更使操作時間延長，而且增加了引入污染的可能性，往往導(dǎo)致反應(yīng)產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果，造成實驗失敗。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，降低各實驗室之間關(guān)于同一檢驗和/或?qū)嶒炓虿煌僮髡呱踔镣徊僮髡卟煌尾僮髟斐傻纳鲜稣`差，提高實驗結(jié)果的精確度、可信性以及實驗的反應(yīng)時間，本發(fā)明提供了一種適用于時間分辨熒光免疫分析的加樣方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種適用于時間分辨熒光免疫法的加樣方法，包括：將樣本加入固相載體包被反應(yīng)板中，向每孔中加入緩沖液，然后加入標(biāo)記物工作液，所述標(biāo)記物工作液的濃度允許在所述緩沖液與標(biāo)記物工作液的體積均不大于50μL時與固相載體充分結(jié)合。

優(yōu)選地，所述樣本中的待測物質(zhì)為甲胎蛋白、新生兒促甲狀腺激素、風(fēng)疹病毒IgM、弓形蟲IgM、巨細胞病毒IgM和單純皰疹病毒IgM中的至少一種。

優(yōu)選地，當(dāng)所述樣本中的待測物質(zhì)為甲胎蛋白時，所述加樣方法為：將樣本加入固相載體包被反應(yīng)板中，向每孔中加入20～30μL緩沖液，然后加入3～7μL標(biāo)記物工作液；其中，所述標(biāo)記物工作液通過將甲胎蛋白單克隆抗體與鑭系元素離子螯合物按5:1～5的質(zhì)量比混合制得母液，再將母液用緩沖液稀釋200～300倍而成。

更優(yōu)選地，所述緩沖液的制備方法為：在含0.01g/L的乙二胺四乙酸二鈉的50mmol/L、pH7.8的Tris-Hcl溶液中加入10.0ml/L～200.0ml/L的小牛血清、牛γ-球蛋白和鼠IgG中的至少一種。

優(yōu)選地，當(dāng)所述樣本中的待測物質(zhì)為新生兒促甲狀腺激素時，所述加樣方法為：將樣本加入固相載體包被反應(yīng)板中，向每孔中加入40～50μL緩沖液，然后加入40～50μL標(biāo)記物工作液；其中，所述標(biāo)記物工作液通過將促甲狀腺激素單克隆抗體與鑭系元素離子螯合物按10:5～10的質(zhì)量比混合制得母液，再將母液用緩沖液稀釋300～400倍而成。

更優(yōu)選地，所述緩沖液的制備方法為：在含0.01g/L的乙二胺四乙酸二鈉的50mmol/L、pH7.8的Tris-Hcl溶液中加入10.0ml/L～200.0ml/L的小牛血清、Tween40和鼠IgG中的至少一種。

優(yōu)選地，當(dāng)所述樣本中的待測物質(zhì)為新生兒風(fēng)疹病毒IgM時，所述加樣方法為：將樣本加入固相載體包被反應(yīng)板中，再立即向每孔中加入20～30μL生物素化抗原，孵育5～10min，再向每孔中加入20～30μL緩沖液，然后加入20～30μL標(biāo)記物工作液；其中，所述標(biāo)記物工作液通過將鏈霉親和素與鑭系元素離子螯合物按1:1～5的質(zhì)量比混合制得母液，再將母液用緩沖液稀釋500～1000倍而成。

更優(yōu)選地，所述緩沖液的制備方法為：在含0.01g/L的乙二胺四乙酸二鈉的50mmol/L、pH7.8的Tris-Hcl溶液中加入10.0ml/L～200.0ml/L的小牛血清和鼠IgG中的至少一種。