[發明專利]DNA甲基化分析中DNA樣本重亞硫酸鹽處理轉化率的評估方法在審
| 申請號： | 201610015862.0 | 申請日： | 2016-01-11 |
| 公開（公告）號： | CN105441574A | 公開（公告）日： | 2016-03-30 |
| 發明（設計）人： | 崔恒宓;劉洋洋 | 申請（專利權）人： | 揚州大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京知識律師事務所 32207 | 代理人： | 盧亞麗 |
| 地址： | 225009 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | dna 甲基化 分析 樣本 亞硫酸鹽 處理 轉化 評估 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種DNA甲基化分析中DNA樣本重亞硫酸鹽處理轉化率的評估方法，包括以下步驟：
(1)設計并合成下列DNA標準品及引物：
1)標準品1：是指與任何已知物種無同源序列的DNA序列，該序列未經重亞硫酸鹽；
2)標準品2：是指標準品1中未甲基化的胞嘧啶全部轉化為尿嘧啶后的序列；
3)引物1：是指根據標準品1的序列設計的用于擴增標準品1的檢測引物；
4)引物2：是指根據標準品2的序列設計的用于擴增標準品2的檢測引物；
(2)使用所述引物1和引物2，以所述標準品1與標準品2按照梯度稀釋為模板，分別做標準曲線，其中標準曲線以模板的拷貝數CN對應相應的Ct值；
(3)將標準品1加入到待檢測DNA樣本中，
(4)將含有標準品1的待檢測DNA樣本使用重亞硫酸鹽進行轉化；
(5)使用引物1和引物2，以步驟(4)處理后的DNA樣本為模板，分別檢測樣本中標準品1與標準品2的Ct值；再根據步驟(2)中的標準曲線，計算出樣本中標準品1與標準品2相應的拷貝數；
(6)使用計算公式：重亞硫酸鹽處理DNA轉化率(％)＝標準品2的拷貝數/(標準品1拷貝數+標準品2拷貝數)×100％，計算轉化率。
2.根據權利要求1所的方法，其特征在于，所述的標準品1的序列如SEQIDNO.1所示，標準品2的序列如SEQIDNO.2所示。
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