[發明專利]一種雞腸炎沙門氏菌感染抗性性狀的分子標記gga-miR-1416-5p及其檢測方法

在審

• 申請號: 201610015294.4
• 申請日: 2016-01-11
• 公開（公告）號: CN105462982A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發明（設計）人: 李顯耀;吳桂賢;劉麗英;劉肖意
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種雞腸炎沙門氏菌感染抗性性狀的分子標記，該抗性分子標記為雞miRNAgga-miR-1416-5p，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。

2.權利要求1所述雞腸炎沙門氏菌感染抗性性狀的分子標記檢測方法，具體步驟如下：

gga-miR-1416-5p的表達量檢測

miRNA反轉錄

用OneStepmiRNAcDNASynthesisKit試劑盒，嚴格按說明書進行；反轉錄體系為20μL，如表1所示；反應程序為：37℃，60min；85℃，5s；反應完成后獲得的cDNA置于-20℃保存備用；

表1miRNA反轉錄體系(20μL)

gga-miR-1416-5p熒光定量PCR

根據gga-miR-1416-5p成熟序列設計引物，如表2所示；利用所設引物，采用SYBRGreenI染料法，按照TaKaRa公司的SYBRPrimeScriptmiRNART-PCRKit說明書，在StratageneMX3000P熒光定量PCR儀上進行擴增，反應體系如表3所示；

表2miRNA定量檢測引物

表3熒光定量PCR體系

熒光定量PCR反應程序采用兩步法：95℃預變性30s，1個循環；95℃5s，60℃30s，40個循環；最后添加溶解曲線(95℃1min，62℃30s，95℃30s)，1個循環，每個cDNA樣品重復三次；以U6作為內參基因，用2^-ΔΔCt方法來計算miRNA的相對表達量，用SAS8.1軟件中單因素方差分析對gga-miR-1416-5p表達量差異進行分析。