[發明專利]一種大米蛋白/阿魏酸復合物或交聯物的制備方法

有效

• 申請號: 201610014670.8
• 申請日: 2016-01-11
• 公開（公告）號: CN105670010B
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發明（設計）人: 夏寧;賈瀟;滕建文;韋保耀;黃麗
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C08J3/24
• 分類號: C08J3/24;C08L89/00;C08K5/09
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司45104
• 代理人: 覃現凱

技術領域

本發明屬于谷物蛋白深加工領域，具體是一種大米蛋白/阿魏酸復合物或交聯物的制備方法。

背景技術

人體新陳代謝產生的自由基對機體組織細胞具有很強的殺傷作用，可引起細胞死亡和組織損傷，如動脈粥樣硬化、癌癥、肺損傷和衰老等。植物蛋白作為一種，因其具有加工特性和營養特性而成為近年來研究的熱點。大米蛋白(Rice protein,RP)是一種優質的植物蛋白，具有氨基酸組成平衡合理，口感溫和，低過敏性和降低膽固醇等優點；而且大米蛋白中含有人體所需的各種氨基酸，配比合理，符合WHO/FAO推薦的理想模式。但是以大米蛋白制備的富含油脂的食品易發生抗氧化降解，多酚類物質由于其具有天然的抗氧化特性，越來越多的應用到富含油脂的食品加工中，從而起到抗氧化作用。蛋白與多酚的結合即保留蛋白質的功能性質，同時又賦予了蛋白質更高的抗氧化特性，這些具有更高活性的產物應用于食品、化妝品保健、醫藥領域有很好市場前景。

阿魏酸(Ferulic acid,FA)是谷物中的常見的酚酸類物質，有較強的抑制脂類的氧化降解的能力和低毒性，廣泛使用在食品和藥品行業。研究發現自然條件下，阿魏酸與蛋白質會發生結合反應，阿魏酸與蛋白質能夠以非共價鍵(氫鍵、疏水或離子的相互作用)或共價鍵相連。此外，堿性或者高溫的反應條件將會促進蛋白與酚酸更好的交聯，可能是由于阿魏酸在堿性條件下易被氧化成醌，醌可以與蛋白質分子中的氨基和巰基發生交聯反應。但是化學法存在以下不足：反應條件在高溫以及堿性條件下可能會產生有毒中間產物，食用性差，顏色深，反應條件不穩定。一般來說，酶法交聯條件比較溫和。

漆酶(Laccase,LAC)是一種多酚氧化酶，能結合多個銅離子，屬于銅藍氧化酶。漆酶作為生物催化劑，不僅具有高效率的催化效果，而且其催化的最終產物是水，因此也是一種綠色催化劑。漆酶催化酚酸與蛋白質交聯有效改善蛋白的功能性質和生理活性(抑菌作用、抗氧化活性)，可能歸因于酚酸經漆酶氧化后能夠與蛋白質中氨基、巰基發生反應引起蛋白質的交聯，交聯物保留了酚類活性基團，從而提高蛋白質的天然屬性，這些產物可以應用到一些抗氧化能力強的醫療、食品與高分子領域。因此，本文選擇阿魏酸與大米蛋白相互結合以期在獲得高抗氧化活性的同時改善其功能性質，這對充分有效地利用大米蛋白資源具有深遠的意義。

發明內容

本發明針對現有大米蛋白與阿魏酸相互作用及其抗氧化機制研究并不完善，制備具有更高抗氧化活性的阿魏酸/大米蛋白交聯物，并且在體系中添加多酚氧化酶，從而獲得具有更高抗氧化活性的功能性大米蛋白配料，提供一種新型的酶法制備功能性米糠蛋白的方法。

本發明的技術方案如下：

一種大米蛋白/阿魏酸復合物或交聯物的制備方法，包括如下步驟：

(1)配制大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液，所述大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液中，大米蛋白的質量濃度為8～12mg/mL，阿魏酸的質量濃度為0.05～0.4mg/mL，漆酶的質量濃度為0～0.1mg/mL，

(2)大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液經攪拌充分反應后，通過透析除去未與大米蛋白結合的游離阿魏酸，再冷凍干燥得到大米蛋白/阿魏酸復合物或大米蛋白/阿魏酸交聯物。

所述大米蛋白的制備方法如下，

(1)將脫脂的大米粉按1:10(w/v)的料液比分散于水中，攪拌均勻得到大米粉分散液，

(2)將大米粉分散液的pH調節至10.0，室溫25℃攪拌2h，再離心得到上清液，

(3)將上清液pH調節至4.8得到蛋白質沉淀，蛋白質沉淀加水得到蛋白液，蛋白液經中和、透析、冷凍干燥后獲得大米蛋白。

所述大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液配制方法如下：

(1)將大米蛋白溶解在pH＝7.0、50mmol/L的PBS緩沖液中，攪拌使其充分溶解得到大米蛋白分散液；

(2)將阿魏酸溶解在pH＝7.0、50mmol/L的PBS緩沖液中，水浴加熱促進其完全溶解，得到阿魏酸溶液；

(3)將大米蛋白分散液和阿魏酸溶液混合均勻，再加入漆酶攪拌均勻，得到大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液。

步驟(2)中，大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液的反應工藝條件如下：反應溫度為25～30℃，反應時間為0.5～4h。

步驟(2)中，當大米蛋白/阿魏酸/漆酶混合液中漆酶的質量濃度不為零時，反應工藝條件如下：反應溫度為25～30℃，反應時間為3～4h。

步驟(2)中，所述透析的工藝條件如下：透析溫度為4℃，透析時間為24h。