[發明專利]一種胸膜肺炎放線桿菌的ApNGT基因及其應用

在審

• 申請號: 201610012793.8
• 申請日: 2016-01-11
• 公開（公告）號: CN105505959A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發明（設計）人: 程劍松;宋其濤;王鵬
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/10;C07K1/107
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種胸膜肺炎放線桿菌的ApNGT基因，具有SEQNO:1所示的ApNGT基因序列。

2.一種胸膜肺炎放線桿菌的ApNGT基因，其編碼的620個氨基酸序列見SEQNO2。

3.權利要求1所述胸膜肺炎放線桿菌的ApNGT基因，其中的引物SEQNO: 3CATTTCCATTTTGCATTGGGGGCATCAAACGGTATTAC為特異擴增胸膜肺炎放線桿菌的ApNGT基因 的上游引物；SEQNO:4GCCCCCAATGCAAAATGGAAATGCACTTTCACTTTG為胸膜肺炎放線桿菌的 ApNGT基因的下游引物。

4.權利要求1所述胸膜肺炎放線桿菌的ApNGT基因，其中1）包含N-X-S/T序列的多肽進 行糖基化修飾，反應為體系30ul，包含pH=8.0Tris-HCl(50mM),MgCl₂(5mM),UDP-Glc (10mM),NaCl(10mM),ApNGT(0.3mg/ml),Peptide(1mM),用ddH₂O補齊，37℃水浴條件下反 應45分鐘，采用MALDI-TOF定性和HPLC定量；

2）在包含N-X-S/T序列的蛋白hmw1ct(NCBI:Accession:WP_014550671.1GI: 504363569,AtaC1866–2428)進行糖基化修飾，反應體系為200ul，包含pH=8.0Tris-HCl (50mM),MgCl₂(5mM),UDP-Glc(5mM),NaCl(100mM),ApNGT(0.3mg/ml),Protein(1mg/ml), 37℃反應一個小時，使用MALDI-TOF定性。

5.權利要求1所述的胸膜肺炎放線桿菌ApNGT基因在制備提高糖基化多肽效率方面的 應用。