[發(fā)明專利]一種用于神經(jīng)損傷修復(fù)的神經(jīng)支架、其制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610009594.1
• 申請日: 2016-01-08
• 公開（公告）號: CN105597148B
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬富凱;朱劍虹;朱侗明;王智富
• 申請（專利權(quán)）人: 上海神因生物科技有限公司
• 主分類號: A61L27/24
• 分類號: A61L27/24;A61L27/36;A61L27/54;A61L27/20
• 代理公司: 上海開祺知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31114
• 代理人: 費(fèi)開逵

1.一種用于神經(jīng)損傷修復(fù)的神經(jīng)支架，其特征在于，包括膠原支架、培養(yǎng)在膠原支架上的神經(jīng)干細(xì)胞、以及由肝素固定在膠原支架上的生長因子，所述的生長因子具有肝素結(jié)合域，所述肝素是通過交聯(lián)溶液交聯(lián)在膠原支架上的；其中，所述的交聯(lián)溶液是濃度為1～25mM的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和1～12.5mM的N-羥基丁二酰亞胺的混合溶液。

2.一種用于神經(jīng)損傷修復(fù)的神經(jīng)支架的制備方法，包括如下步驟：

1)配制膠原溶液

獲取動物膠原組織，將其溶解于0.05～0.1％冰醋酸-PBS(v/v)中，配制成膠原溶液；

2)凍干、滅菌

將膠原溶液倒入模具中，再將模具放入液氮冷凍，然后用凍干機(jī)凍干，凍干時間為8～12小時，得到膠原海綿，再進(jìn)行滅菌處理；所述的膠原海綿為三維膠原材料，孔徑為30～200μm；

3)交聯(lián)、洗滌

將肝素溶解于交聯(lián)溶液中，將滅菌的膠原海綿浸沒于含肝素的交聯(lián)溶液中進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)溫度30～40℃，交聯(lián)時間3～4小時，交聯(lián)結(jié)束后用磷酸緩沖鹽溶液洗滌4～8小時，再用去離子水洗滌4～8小時；

其中，所述的交聯(lián)溶液為濃度為1～25mM的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和1～12.5mM的N-羥基丁二酰亞胺的混合溶液；

4)成型

將交聯(lián)后的膠原海綿吸去水分，浸沒于生長因子溶液中成型，成型溫度30～40℃，成型時間0.5～2小時，獲得膠原支架；其中，所述的生長因子具有肝素結(jié)合域；

5)培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞

將神經(jīng)干細(xì)胞原代培養(yǎng)在步驟4)得到的膠原支架上，獲得所述的神經(jīng)支架。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于神經(jīng)損傷修復(fù)的神經(jīng)支架的制備方法，其特征在于，步驟1)中獲得的膠原溶液中膠原的濃度為5～20mg/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于神經(jīng)損傷修復(fù)的神經(jīng)支架的制備方法，其特征在于，步驟2)中利用電子束輻照對膠原海綿進(jìn)行滅菌處理，處理?xiàng)l件為6～12kGy⁶⁰Co。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于神經(jīng)損傷修復(fù)的神經(jīng)支架的制備方法，其特征在于，步驟3)中含肝素的交聯(lián)溶液中，肝素的濃度為2～4mg/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于神經(jīng)損傷修復(fù)的神經(jīng)支架的制備方法，其特征在于，步驟4)所述的生長因子溶液中生長因子的濃度為50～500μg/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求2-6任一項(xiàng)所述用于神經(jīng)損傷修復(fù)的神經(jīng)支架的制備方法，其特征在于，步驟4)中所述的生長因子為堿性成纖維細(xì)胞生長因子或血管內(nèi)皮生長因子。

8.根據(jù)權(quán)利要求2-6任一項(xiàng)所述用于神經(jīng)損傷修復(fù)的神經(jīng)支架的制備方法，其特征在于，步驟5)中將神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)Hoechst標(biāo)記后，再培養(yǎng)在膠原支架上，神經(jīng)干細(xì)胞的個數(shù)為5～10×10⁵個。

9.根據(jù)權(quán)利要求2-6任一項(xiàng)所述用于神經(jīng)損傷修復(fù)的神經(jīng)支架的制備方法，其特征在于，所獲得的神經(jīng)支架為神經(jīng)導(dǎo)管或圓形、橢圓形、方形或不規(guī)則海綿狀神經(jīng)支架。