[發明專利]轉基因玉米IE034外源插入片段3’端旁側序列及檢測方法有效
| 申請號： | 201610009212.5 | 申請日： | 2016-01-07 |
| 公開（公告）號： | CN105543238B | 公開（公告）日： | 2020-04-07 |
| 發明（設計）人： | 杜智欣;付偉;魏霜;乾義柯;王晨光;朱鵬宇;王國英;朱水芳 | 申請（專利權）人： | 中國檢驗檢疫科學研究院 |
| 主分類號： | C12N15/29 | 分類號： | C12N15/29;C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100176 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 轉基因 玉米 ie034 插入 片段 旁側 序列 檢測 方法 | ||
1.用于檢測轉基因玉米IE034外源插入片段3'端旁側DNA序列的特異性PCR檢測引物及探針，其特征在于，所述3'端旁側DNA序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物的核苷酸序列為：
上游引物：5'-CACTCCGCATACAGCTCGATAATCT-3'，
下游引物：5'-TATGGTCTTCTTGCTTCGTGCTTTT-3'；
探針為：5'-F-TACTCTTCCGAGCAAAGGACGCC-Q-3'。
2.根據權利要求1所述的引物及探針，其中，F為FAM、HEX、TET、JOE、VIC、FITE、CY3或CY5；Q為TAMRA、ROX、DABCY、BHQ1或BHQ2。
3.一種轉基因玉米IE034的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有權利要求1或2所述引物及探針。
4.一種轉基因玉米IE034的檢測方法，其特征在于，所述方法包括：以樣品總DNA為模板利用權利要求1或2所述的引物及探針進行實時熒光PCR擴增反應，檢測擴增反應產物中是否具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述實時熒光PCR擴增的反應程序為：95℃10min；95℃15sec，60℃60sec40個循環。
6.根據權利要求4或5所述的檢測方法，其特征在于，實時熒光PCR擴增的反應體系為：2×GoldStar TaqMan Mixture10μl，10μM上游引物0.4μl，10μM下游引物0.4μl，10μM探針0.4μl，DNA模板2μl，加入滅菌蒸餾水至總體系為20μl。
7.權利要求1或2所述的引物及探針在檢測轉基因玉米IE034中的應用。
8.權利要求3所述的試劑盒在檢測轉基因玉米IE034中的應用。
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