[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)基因玉米IE034外源插入片段3’端旁側(cè)序列及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610009212.5
• 申請(qǐng)日: 2016-01-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105543238B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜智欣;付偉;魏霜;乾義柯;王晨光;朱鵬宇;王國(guó)英;朱水芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12N15/29
• 分類號(hào): C12N15/29;C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米IE034外源插入片段3'端旁側(cè)DNA序列的特異性PCR檢測(cè)引物及探針，其特征在于，所述3'端旁側(cè)DNA序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物的核苷酸序列為：

上游引物：5'-CACTCCGCATACAGCTCGATAATCT-3'，

下游引物：5'-TATGGTCTTCTTGCTTCGTGCTTTT-3'；

探針為：5'-F-TACTCTTCCGAGCAAAGGACGCC-Q-3'。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物及探針，其中，F(xiàn)為FAM、HEX、TET、JOE、VIC、FITE、CY3或CY5；Q為TAMRA、ROX、DABCY、BHQ1或BHQ2。

3.一種轉(zhuǎn)基因玉米IE034的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有權(quán)利要求1或2所述引物及探針。

4.一種轉(zhuǎn)基因玉米IE034的檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法包括：以樣品總DNA為模板利用權(quán)利要求1或2所述的引物及探針進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增反應(yīng)，檢測(cè)擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物中是否具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃10min；95℃15sec，60℃60sec40個(gè)循環(huán)。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的檢測(cè)方法，其特征在于，實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：2×GoldStar TaqMan Mixture10μl，10μM上游引物0.4μl，10μM下游引物0.4μl，10μM探針0.4μl，DNA模板2μl，加入滅菌蒸餾水至總體系為20μl。

7.權(quán)利要求1或2所述的引物及探針在檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米IE034中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求3所述的試劑盒在檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米IE034中的應(yīng)用。