[發明專利]蛋白芯片、蛋白質芯片診斷試劑盒制備及使用方法

有效

• 申請號: 201610007369.4
• 申請日: 2016-01-06
• 公開（公告）號: CN105527435B
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發明（設計）人: 胡海;馬艷
• 申請（專利權）人: 廣州市丹藍生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/552
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;朱水平

1.一種蛋白質芯片在制備早期診斷或普查篩檢肺癌的診斷制品中的用途，其特征在于：

所述蛋白質芯片包含但不僅僅包含以下6種肺癌自身抗原蛋白的蛋白標志物：(1)P53抗原片段，其特征氨基酸序列如ID.1sequence所示；(2)SOX2抗原片段，其特征氨基酸序列如ID.2sequence所示；(3)COPB1抗原片段，其特征氨基酸序列如ID.3sequence所示；(4)EFHD2抗原片段，其特征氨基酸序列如ID.4sequence所示；(5)EIF4G3抗原片段，其特征氨基酸序列如ID.5sequence所示；(6)PCNA抗原片段，其特征氨基酸序列如ID.6sequence所示。

2.如權利要求1所述的用途，所述的自身抗原蛋白質的蛋白標志物為重組表達純化的蛋白質。

3.一種蛋白質芯片診斷試劑盒在制備早期診斷或普查篩檢肺癌的診斷制品中的用途，其特征在于，其采用如權利要求1所述的蛋白質芯片檢測樣品，所述蛋白質芯片診斷試劑盒包括：檢測玻片、檢測校正玻片、樣品稀釋液、洗滌液、熒光二抗；

在大腸桿菌中表達包含有如權利要求1中所述的6種抗原特征氨基酸序列的重組蛋白或重組融合蛋白，純化分離這些目標蛋白，使其純度達到80％以上，在各抗原以及人IgG、人IgM中加入適量的生物素化的BSA，以適宜的濃度點樣于經醛基化處理的玻璃基片上，抗原將共價交聯于基片之上，采用牛血清封閉剩余的交聯位點，干燥后4℃干燥保存，得到檢測玻片；

將人IgG及人IgM抗體標準品進行倍比稀釋，選擇適宜的濃度梯度點樣于經醛基化處理的玻璃片基上，抗體標準品將共價交聯于基片之上，采用牛血清封閉剩余的交聯位點，干燥后4℃干燥保存，得到檢測校正玻片；

將含10％牛血清的PBS無菌過濾裝瓶，得到樣品稀釋液；

將含0.02％Tween20的PBS無菌過濾裝瓶，得到洗滌液；

將含有適宜稀釋度的鏈霉親和素-Cy5熒光標記二抗、鏈霉親和素-Cy3熒光標記二抗、羊抗人IgG-Cy5熒光標記二抗及羊抗人IgM-Cy3熒光標記二抗裝瓶，得到熒光二抗。

4.如權利要求3所述的用途，其特征在于將癌胚抗原也點于所述檢測玻片上。