[發(fā)明專利]一種分離提純必特螺旋霉素的工藝方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610006130.5
• 申請日: 2016-01-06
• 公開（公告）號: CN105524133B
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳葵;朱家文;劉慧;牛夢旗;應(yīng)喜平;楊生武
• 申請（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/06
• 代理公司: 上海科盛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225
• 代理人: 趙志遠

本發(fā)明涉及一種分離提純必特螺旋霉素的工藝方法，步驟為：(1)含有必特螺旋霉素的酯提取液，經(jīng)三級逆流洗滌，得到洗后酯溶液；(2)用磷酸鹽溶液第一次反萃洗后酯溶液，得含有必特螺旋霉素的一次水提液；(3)用酯萃取一次水提液，得到濃縮必特螺旋霉素的酯萃取液；(4)用磷酸鹽溶液第二次反萃酯萃取液，得含有必特螺旋霉素的二次水提液；(5)加入乙醇，滴加堿液結(jié)晶，得到必特螺旋霉素成品。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用三級逆流萃取洗滌和變相比的多次溶媒萃取法，達到去除較強極性雜質(zhì)而富集有效組分的目的；并通過加入乙醇調(diào)節(jié)結(jié)晶體系極性和采用低濃度堿液調(diào)節(jié)結(jié)晶液pH的方法，有效去除組分間雜質(zhì)并富集有效組分。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種分離提純必特螺旋霉素的工藝方法，屬于抗生素分離提純技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(Macrolides antibiotics)是應(yīng)用最為廣泛的抗菌藥物之一，分子結(jié)構(gòu)母體是14～16元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯，內(nèi)酯環(huán)上的羥基通過糖苷鍵與1～3分子的糖或氨基糖相連。迄今為止發(fā)現(xiàn)的該類抗生素達100余種，臨床上常用的有：14元環(huán)紅霉素(Erythromycin)及其衍生物羅紅霉素(Roxithromycin)、克拉霉素(Clarithromycin)，15元環(huán)紅霉素衍生物阿奇霉素(Azithromycin)，16元環(huán)主要有交沙霉素(Josamycin)、柱晶白霉素(Kitasamycin)、麥迪霉素(Midecamycin)、普拉特霉素(Platenomycin)、泰樂菌素(Tylosin)和螺旋霉素(Spiramycin)及其衍生物等。

必特螺旋霉素(Bitespiramycin)，是一種酰化螺旋霉素所組成的多組分混合物，如圖1所示，圖1中，1.螺旋霉素Ⅲ，2.單乙酰螺旋霉素II，3.單乙酰螺旋霉素III，4.丙酰螺旋霉素II，5.丙酰螺旋霉素III，6.(異)丁酰螺旋霉素II，7.異戊酰螺旋霉素I，8.(異)丁酰螺旋霉素III，9.異戊酰螺旋霉素II，10.異戊酰螺旋霉素III。必特螺旋霉素由工程菌Stmptomyces spiramyceticus WSJ-1產(chǎn)生，是國內(nèi)首例具有自主知識產(chǎn)權(quán)的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。必特螺旋霉素的藥效試驗表明，其對支原體及革蘭氏陽性菌抑制活性較高，對臨床耐紅霉素的金葡球菌僅有極少交叉耐藥性，抗菌活性及治療效果優(yōu)于乙酰螺旋霉素、紅霉素、麥迪霉素。

必特螺旋霉素成品是由極性不同的酰化螺旋霉素和未知雜質(zhì)所組成的混合物，各組分的極性差異致使雜質(zhì)分布非常復(fù)雜，如圖1。目前必特螺旋霉素的合格標準已明確規(guī)定，其規(guī)格為異戊酰螺旋霉素III≥30％，異戊酰螺旋霉素I+II+III≥60％，總酰化螺旋霉素≥80％，螺旋霉素≤1.0％，總未知雜質(zhì)≤5.0％。由于極性接近的有效組分和雜質(zhì)的性質(zhì)極為相似，因此在分離提純的過程中，極性相近的有效組分和未知雜質(zhì)保持相同程度的去留趨勢，將總未知雜質(zhì)含量控制在不高于5％這一苛刻范圍內(nèi)已成為生產(chǎn)必特螺旋霉素合格品的難點。

對于多組分藥物的分離提純并無太多可以借鑒的成功案例。必特螺旋霉素作為國家一類新藥，其組分復(fù)雜，目前已報道的關(guān)于分離提純必特螺旋霉素的研究主要集中在溶媒萃取法、大孔樹脂吸附法等工藝的研究。例如，中國發(fā)明專利CN101921302B公開了一種從發(fā)酵液中提取必特螺旋霉素的純化工藝，該純化方法通過萃取，尤其是通過緩沖鹽溶液洗滌萃取相，去除了其中殘留的螺旋霉素，優(yōu)化了必特螺旋霉素的組分分配。中國發(fā)明專利CN103694295A公開了一種優(yōu)化必特螺旋霉素組分的方法，通過膜分離、大孔樹脂吸附洗脫、洗滌和萃取操作，采用分步結(jié)晶的方法從水相中提取必特螺旋霉素，可去除弱極性雜質(zhì)并富集異戊酰螺旋霉素III。然而，針對如何去除組分間雜質(zhì)并提高有效組分的含量，未見有相關(guān)報道。

在工業(yè)生產(chǎn)中，分離提純必特螺旋霉素的工藝主要來源于生產(chǎn)螺旋霉素的工藝方法，即溶媒萃取法，該方法的基本原理為：必特螺旋霉素在不同的pH溶液中以不同的化學(xué)狀態(tài)存在，基于這種特性，使必特螺旋霉素在不同溶媒中發(fā)生相轉(zhuǎn)移，進而達到濃縮和提純的目的。然而，溶媒萃取法對必特螺旋霉素單個組分沒有選擇特異性，加之其組分及雜質(zhì)種類多、發(fā)酵液不穩(wěn)定等因素，生產(chǎn)合格的必特螺旋霉素成品有很大的難度。