[發明專利]高效誘導大豆子葉節外植體產生叢生芽的方法及培養基

有效

• 申請號: 201610005839.3
• 申請日: 2016-01-06
• 公開（公告）號: CN105638468B
• 公開（公告）日: 2017-09-26
• 發明（設計）人: 鄭志民
• 申請（專利權）人: 沈陽善達生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 沈陽維特專利商標事務所(普通合伙)21229
• 代理人: 霍光旭

1.高效誘導大豆子葉節外植體產生叢生芽的培養基，其特征在于，所述培養基包括MSB基本培養基，2-(N-嗎啡啉)乙磺酸0.5～1.5g/L，蔗糖20～30g/L，谷氨酰胺40～60mg/L，天冬酰胺40～60mg/L，6-芐氨基嘌呤0.5～2mg/L，瓊脂6～8g/L，pH值為5.6～5.8。

2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述培養基包括MSB基本培養基，2-(N-嗎啡啉)乙磺酸1g/L，蔗糖25g/L，谷氨酰胺50mg/L，天冬酰胺50mg/L，6-芐氨基嘌呤1mg/L，瓊脂6.5g/L，pH值為5.8。

3.高效誘導大豆子葉節外植體產生叢生芽的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)按照權利要求1或2任一所述的配方配制 培養基；

2)大豆種子消毒滅菌及萌發，將大豆種子先用乙醇消毒5-10分鐘，再用過氧化氫消毒15-30分鐘，最后用滅菌水清洗3-5遍，之后再在大豆種子中加入滅菌水，放入4℃下靜置培養至長出5-8mm胚軸；

3)大豆子葉節外植體的制備，將步驟2)中長出5-8mm胚軸的大豆種子剝去種皮，切去部分胚軸，留下帶有3-5mm上胚軸的大豆種子，沿胚軸中線縱向切開上胚軸，得到帶有3-5mm上胚軸和頂端分生組織的大豆子葉節，即得到大豆子葉節外植體；

4)叢生芽的誘導，將步驟3)中制備的大豆子葉節外植體接入步驟1)制備的所述培養基中，置于溫室中培養，培養溫度為24-26℃，濕度為50-70％，光照強度為1500-2000lux，光照時間為16h，7-10天后得到具有2-5株叢生芽的子葉節外植體；

5)大量叢生芽的誘導，將步驟4)中獲得的長有2-5株叢生芽的子葉節外植體取出，切除大叢生芽，繼續將其置于步驟1)中配置的所述培養基上并于溫室中培養，培養溫度為24-26℃，濕度為50-70％，光照強度為1500-2000lux，光照時間為16h，培養10-15天后獲得具有20-40株叢生芽的子葉節外植體。

4.根據權利要求3所述的高效誘導大豆子葉節外植體產生叢生芽的方法，其特征在于，步驟2)中乙醇的體積分數為70-80％。

5.根據權利要求3所述的高效誘導大豆子葉節外植體產生叢生芽的方法，其特征在于，步驟2)中過氧化氫的體積分數為15-20％，并且用過氧化氫給種子消毒時，將種子置于25-28℃振蕩培養箱中黑暗振蕩，轉速為100-200r/min。

6.根據權利要求3所述的高效誘導大豆子葉節外植體產生叢生芽的方法，其特征在于，步驟2)中將大豆種子消毒滅菌后，再加入的滅菌水的量為剛沒過大豆種子即可，將加有滅菌水的大豆種子培養14-18h，長出5-8mm胚軸。

7.根據權利要求3所述的高效誘導大豆子葉節外植體產生叢生芽的方法，其特征在于，步驟4)中將所述大豆子葉節外植體插入所述培養基中的方式為斜插，子葉葉面朝上。

8.根據權利要求3所述的高效誘導大豆子葉節外植體產生叢生芽的方法，其特征在于，步驟5)中切除的大叢生芽長度為2-4cm。