[發明專利]一種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法

有效

• 申請號: 201610005808.8
• 申請日: 2016-01-05
• 公開（公告）號: CN105572057B
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 張騰;蘇少博;李光飛
• 申請（專利權）人: 山西瑞亞力科技有限公司
• 主分類號: G01N21/29
• 分類號: G01N21/29
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 雷立康

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法。本發明主要解決了現有微生物濁度的測定方法存在操作過程頻繁、易對培養物造成污染的技術問題。使用本發明制作的比色卡進行微生物培養液濁度的測定，可在不打開無菌培養瓶的情況下，快速測得到微生物培養液的濁度，測量精確度可以達到±0.1，解決了現有微生物濁度的測定方法存在操作過程頻繁、易對培養物造成污染的技術問題。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法。

背景技術

目前，以基因工程藥物為主導的基因工程應用產業已成為全球發展最快的產業之一，具有非常廣闊的發展前景。大腸桿菌因其易于操作、遺傳背景清楚、生產成本低和表達水平高而被廣泛應用于外源基因的克隆表達。在利用大腸桿菌作為基因工程基礎工具的過程中，經常需要測定大腸桿菌培養物的濁度，即在分光光度計上，于波長為600nm處測試大腸桿菌培養液的吸光度。常見的次操作，包括大腸桿菌感受態的制備過程和外源蛋白的誘導表達步驟。特別在外援蛋白誘導表達時判斷大腸桿菌濁度尤為重要，如果誘導時期過早，可能導致重組蛋白的表達量低，而誘導時期過晚，可能導致菌液中營養物質不足，導致重組蛋白表達量低或形成無活性的包涵體。傳統的判斷方法為依賴分光光度計，需要將細菌培養液取出后加入到比色皿中進行測量，結果雖然準確，但是操作過程需要頻繁打開處于無菌狀態的培養瓶，容易對培養物造成污染。而有經驗的操作者往往依靠肉眼初步判斷培養液濁度后，估計培養物濁度達到技術區間后(OD600＝0.6～0.8)再在機器上進行一次精確測量。

發明內容

本發明的目的是解決現有微生物濁度的測定方法存在操作過程頻繁、易對培養物造成污染的技術問題，提供一種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

一種快速測定微生物培養液濁度比色卡的制作方法，包括以下步驟：

1)取無菌錐形搖瓶置于超凈臺上，向錐形搖瓶中依次倒入50ml LB培養基和50ul卡那霉素，接入10ul菌種，再將錐形搖瓶放置搖床上，于37℃的溫度和 180r/min的轉速下進行培養；

2)在培養過程中，利用分光光度計測定培養液的濁度，在濁度等于0.1、 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0時分別取樣并分別置于10個無色玻璃小瓶中，使無色玻璃小瓶中培養液液面高度等于2.0cm，向各無色玻璃小瓶的培養液中加入疊氮化鈉使其濃度達到0.1％以終止微生物生長，最后在各無色玻璃小瓶上標注濁度編號；

3)根據RGB顏色模式，A＝Rx：Gy：Bz，其中A表示濁度；R、G、B表示紅綠藍三色；x、y、z表示比例；制作一條高度為2.0cm的黑白顏色漸變比色條帶，該黑白顏色漸變比色條帶的0≤x，y，z≤255；

4)將步驟2)中標注濁度編號的無色玻璃小瓶與比色條帶的顏色進行比較并標記濁度值，即將步驟2)中裝有濁度等于0.1培養液的無色玻璃小瓶在比色條帶的不同顏色間移動，當透過無色玻璃小瓶剛好無法看見比色條帶的顏色時，則比色條帶的這一位置對應的濁度值即為0.1，在比色條帶這一位置標記0.1；按照上述操作，依次分別標記比色條帶濁度值等于0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、 0.8、0.9和1.0的位置，即制作出快速鑒定微生物培養液濁度的比色卡。

使用本發明制作的比色卡進行微生物培養液濁度的測定，可在不打開無菌培養瓶的情況下，快速測得到微生物培養液的濁度，測量精確度可以達到±0.1，解決了現有微生物濁度的測定方法存在操作過程頻繁、易對培養物造成污染的技術問題。因此，與背景技術向比，本發明具有不會對培養物造成污染且操作方法簡便的優點。

為表明本發明具有以上優點，分別通過本發明制作的濁度比色卡和分光光度計對待測大腸桿菌培養液進行濁度測試，比對數據如下：