[發(fā)明專利]一種簡(jiǎn)單快速接種中國小麥花葉病毒的方法及其應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610005687.7 | 申請(qǐng)日： | 2016-01-04 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN105441480A | 公開（公告）日： | 2016-03-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張恒木;羊健;張芬;李靜;陳劍平 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/84 | 分類號(hào)： | C12N15/84 |
| 代理公司： | 浙江一墨律師事務(wù)所 33252 | 代理人： | 黃娟 |
| 地址： | 310021 *** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 簡(jiǎn)單 快速 接種 中國 小麥 花葉 病毒 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種簡(jiǎn)單快速接種中國小麥花葉病毒的方法，包括以下步驟：
1)引物設(shè)計(jì)：通過本實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的中國小麥花葉病毒基因組片段RNA1和RNA2序列共設(shè)計(jì)4條引物，其中引物對(duì)R1f/R1r用于擴(kuò)增RNA1,引物對(duì)R2f/R2r用于擴(kuò)增RNA2；
2)病毒基因組擴(kuò)增反應(yīng)：以病毒基因組cDNA作模板，采用高保真的PhusionDNA聚合酶進(jìn)行擴(kuò)增，其中引物對(duì)R1f/R1r擴(kuò)增的RNA1產(chǎn)物長約7.2-kb，引物對(duì)R2f/R2r擴(kuò)增的RNA2產(chǎn)物長約3.6-kb；
3)病毒基因組克?。翰《救L基因組RNA1、RNA2擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)切膠純化后，采用In-Fusion克隆試劑盒參照商家說明書分別連接至線性化的雙元載體質(zhì)粒上，測(cè)序驗(yàn)證獲得分別含RNA1和RNA2全長cDNA片段的重組雙元載體質(zhì)粒，然后利用電轉(zhuǎn)化儀將含RNA1和RNA2全長cDNA片段的重組質(zhì)粒分別導(dǎo)入農(nóng)桿菌；
4)人工接種：將含有中國小麥花葉病毒基因組的農(nóng)桿菌等量混合，然后通過注射器將農(nóng)桿菌混合液浸潤入植物體內(nèi)，2周后進(jìn)行病毒分子檢測(cè)并觀測(cè)植株表型變化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的簡(jiǎn)單快速接種中國小麥花葉病毒的方法的應(yīng)用，包括以下步驟：經(jīng)人工接種中國小麥花葉病毒的植株，分別置于12、15、17、20、25℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)，二周后進(jìn)行病毒分子檢測(cè)并分析病毒在不同溫度下的復(fù)制等特性。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，未經(jīng)浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201610005687.7/1.html，轉(zhuǎn)載請(qǐng)聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
