[發明專利]一種凝血因子基因突變的定點修復載體系統及方法

在審

• 申請號: 201610005683.9
• 申請日: 2016-01-05
• 公開（公告）號: CN105567735A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 李大力;關玉婷;王立人;劉明耀
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;A61K48/00;A61P7/04
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

技術領域

本發明涉及凝血因子基因編輯技術領域，具體涉及一種凝血因子的原位修復方法 及其用途。

背景技術

人類的凝血過程是由各種凝血因子(如凝血因子I、II、VIII、IX、X、XI)等參與的一 個級聯反應，在此反應中的任何一種因子發生突變都可能導致級聯反應無法進行，凝血過 程無法完成，臨床上就表現為凝血障礙、自發性出血(尤其發生在關節、肌肉以及軟組織。) 等血友病的癥狀。而絕大多數血友病是由于表達凝血因子VIII(FVIII或F8因子)或IX(FIX 或F9因子)的基因發生突變所導致的。其中由于VIII基因突變所造成凝血障礙稱為A型血友 病。VIII基因編碼凝血因子VIII，后者是一種血漿中的糖蛋白。在正常生理條件下與von Wilebrand因子(vWF)結合,呈現靜息狀態。一旦機體出現傷口流血，便會通過凝血級連反應 激活VIII因子，使得VIII因子脫離vWF，進而與IX因子結合一同切割X因子前體使其成為成 熟的Xa后者最終將纖維蛋白原轉變為纖維蛋白引發凝血。目前，50～60％的A型血友病是由 于編碼VIII因子的基因在蛋白活性區域發生錯意、終止突變而導致的，而其余40～50％的 發病是由于VIII基因內部的重排和倒位所致。A型血友病患者占血友病發病總數的70～ 80％。B型血友病(凝血因子IX缺乏癥)的病因是由于上述反應中表達凝血因子IX的基因 (Xq27.1)發生突變，導致凝血因子IX表達被提前終止或其蛋白質功能喪失所導致的一種性 連鎖隱性遺傳疾病，其發病率約占血友病患者總人數的25％。凝血因子VIII與IX都位于人 類X染色體上，由于人類女性有兩條X染色體而男性只帶有一條X染色體，故此A/B型血友病 主要在男性中發病，男性A型血友病的發病率約為1/5000～1/10000；B型約為1/20000～1/ 30000。女性則多為一條X染色體上VIII基因或IX基因突變的攜帶者。另外，在沒有家族史的 病例中有多達1/3的病例是由于相關基因自發突變而發病的。

臨床上根據血友病患者血液中相應凝血因子的含量來劃分其病情。含量在0.05- 0.40IU/mL的為輕度患者，其發病表現主要為重大創傷或手術后大量流血，自發性流血較為 少見；含量在0.01-0.05IU/mL的為中度患者，其發病主要為微創手術后持續性流血或偶爾 伴有自發性流血；含量少于0.01IU/mL的則為重度患者，可見關節或肌肉的自發性流血。