[發明專利]用于提高雜交瘤細胞克隆數量的添加劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201610005108.9
• 申請日: 2016-01-05
• 公開（公告）號: CN105462934B
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 張建珍;李全;吳凡;焦守恕
• 申請（專利權）人: 同昕生物技術（北京）有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

本發明用于提高雜交瘤細胞克隆數量的添加劑及其制備方法，涉及免疫學研究技術，包括如下步驟：(1)獲取可表達IL?6蛋白的真核細胞的培養液上清，所述細胞培養液上清中含有表達的IL?6蛋白；(2)對細胞培養液上清進行超濾，然后過濾除菌，獲得細胞培養液上清濃縮液；(3)向細胞培養液上清濃縮液中加入亞硒酸鈉，獲得所述添加劑。試驗數據證明，采用該添加劑之后雜交瘤細胞克隆數量可提高將近5倍。本發明還進一步提供了含有上述添加劑的雜交瘤細胞培養基。

技術領域

本發明涉及用于提高雜交瘤細胞克隆數量的添加劑及其制備方法，屬于生物及醫藥領域。

背景技術

免疫學是當今醫療和科研必不可少的一部分。自40年前Edelman和Porter率先分離出免疫球蛋白分子之后，抗體已被應用于很多方面。抗體應用于蛋白質組學和診斷學方面以檢測腫瘤和細菌抗原；還可以在山羊奶和植物中合成以作為疫苗和抗腫瘤因子；還可用作藥物載體工具以治療病毒、細菌感染和腫瘤。

雜交瘤技術及單克隆抗體的生產為研究工作帶來了革命，提供了無數的、獨特的單克隆抗體試劑，用于特異性抗原的鑒定、分離、清除、活化或檢測等。制備分泌抗體的B細胞雜交瘤細胞依賴于抗原反應性B細胞與永生化的骨髓瘤細胞高效率的融合，以及隨后的鑒定和對能持續生長的能產生特異性抗體的細胞系的分離。在細胞融合的過程中，細胞會受到不同程度的損傷。為了使融合后的雜交瘤細胞獲得最佳生長條件、增加雜交瘤的產量，在雜交瘤細胞克隆化培養中，需要添加一些額外的生長因子或補充物。有些實驗室會使用滋養細胞層(脾細胞或腹腔巨噬細胞)。滋養層的作用一般認為有如下幾個方面：1、產生某些細胞因子來調節雜交瘤細胞的生長；2、增加細胞濃度以促進單個或少數分散雜交瘤密度依賴細胞的繁殖(單克隆抗體-雜交瘤技術講義，第四軍醫大學微生物學教研室編)；3、吸收某些有害的代謝產物；4、吞噬清除死細胞及其碎片；5、抑制可能的污染的微生物的生長(Keith James，et a.Human monoclonal antibody production current status andfuture prospects.J Immunol Meth 1987；100:5)等。除了飼養層細胞，也可以使用IL-6來源的商品化的添加物(Origen HCF.IGEN Inc，Gaithersburg,MD)。然而，在制備飼養層細胞時，每次融合都要殺掉4-5只小白鼠，不利于動物福利，而商品化的雜交瘤添加物價格又比較昂貴。

發明內容

本發明提供一種用于提高雜交瘤細胞克隆數量的添加劑，既能夠有效促進雜交瘤細胞的生長，又能降低生產成本并保護動物，滿足科研和醫療的需求。

本發明提供的技術方案如下：

用于提高雜交瘤克隆數量的添加劑的制備方法，包括如下步驟：

(1)獲取可表達IL-6蛋白的真核細胞的培養液上清，所述細胞培養液上清中含有表達的IL-6蛋白；

(2)對細胞培養液上清進行超濾，然后過濾除菌，獲得細胞培養液上清濃縮液；

(3)向細胞培養液上清濃縮液中加入亞硒酸鈉，獲得所述添加劑。

本發明的技術方案中，所述超濾是指，用截留高分子量的超濾管對細胞培養上清進行超濾后，再用截留低分子量的超濾管對濾過液進行濃縮；所述過濾除菌是指，用0.22μm的濾膜對濃縮后的細胞培養上清進行過濾。

本發明的一些技術方案中，所述截留高分子量的超濾管的規格選自30KD、50KD和100KD中的任何一種，所述截留低分子量的超濾管的規格選自3KD、5KD和10KD中的任何一種。其中一組優選為：所述截留高分子量的超濾管的規格50KD，所述截留低分子量的超濾管的規格10KD。

本發明的技術方案中，優選所述亞硒酸鈉的終濃度為1mg/L-10μg/L。