[發明專利]用于提高雜交瘤細胞克隆數量的添加劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201610005108.9
• 申請日: 2016-01-05
• 公開（公告）號: CN105462934B
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 張建珍;李全;吳凡;焦守恕
• 申請（專利權）人: 同昕生物技術（北京）有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

1.用于提高雜交瘤克隆數量的添加劑的制備方法，包括如下步驟：

（1）獲取可表達IL-6蛋白的真核細胞48小時以內的培養液上清，所述細胞培養液上清中含有表達的IL-6蛋白；

（2）用截留50KD的超濾管對細胞培養液上清進行超濾后，再用截留10KD的超濾管對濾過液進行濃縮，然后過濾除菌，獲得細胞培養液上清濃縮液；

（3）向細胞培養液上清濃縮液中加入亞硒酸鈉至終濃度為1mg/L-10μg/L，獲得所述添加劑；

所述可表達IL-6蛋白的真核細胞選自轉化有可表達IL-6蛋白的重組表達載體的CHO細胞系。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述過濾除菌是指，用0.22μm的濾膜對濃縮后的細胞培養液上清進行過濾。

3.根據權利要求1所述的制備方法，所述重組表達載體為pcDNA5／FRT-IL6，是以pcDNA5／FRT為骨架，pcDNA5／FRT和IL-6全長cDNA經過用KpnI和XbaI雙酶切，經過電泳、切膠回收后，用T4 DNA連接酶過夜連接，連接產物轉化感受態細胞E．coli DH5a，涂布Amp平板并挑取單菌落鑒定，鑒定正確的陽性克隆的質粒命名為pcDNA5/FRT-IL6。

4.用于提高雜交瘤細胞克隆數量的添加劑，其特征在于，采用權利要求1-3任一所述的制備方法制備。

5.雜交瘤細胞的培養基，其特征在于，是在含有10%胎牛血清的DMEM中添加有權利要求4所述的添加劑，添加的所述添加劑的體積比例為20%。

6.培養雜交瘤細胞的方法，其特征在于，在其培養基中添加體積比例為20%的權利要求4所述的添加劑，或采用權利要求5所述的培養基。