[發明專利]一種小麥赤霉病安全快速鑒定方法

在審

• 申請號: 201610004919.7
• 申請日: 2016-01-05
• 公開（公告）號: CN105647816A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 穆平;常樂;王春華
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12Q1/18
• 代理公司: 北京國智京通知識產權代理有限公司 11501
• 代理人: 孫文彬

技術領域

本發明涉及糧食選種育種領域，特別是一種小麥赤霉病安全快速鑒定方 法。

背景技術

小麥赤霉病是主要由禾谷鐮刀菌引起的世界性的疾病，它不僅能導致小 麥減產絕產，還會產生毒素，危及人和動物的健康。在我國，小麥赤霉病原 本多發于江浙一帶溫暖濕潤的地區，但近些年由于全球氣候變暖及秸稈還田 等因素的影響，小麥赤霉病發病逐漸北移，在2012年以來在黃淮麥區也有爆 發。所以小麥赤霉病的防治與抗病品種的選育是一個亟待解決的問題，然而 在小麥抗病品種鑒定的實驗方法上還存在著很大不足。

首先，傳統的田間鑒定方法直接將病菌帶入自然環境中，易引發環境污 染、病情爆發；其次，在田間常用的接種方法包括噴霧法和單花滴注法，其 中噴霧法已被證實其針對的抗侵入性沒有單花滴注法針對的抗擴展性穩定性 高，所以，將病菌注入小麥內部是現階段要證實小麥抗赤霉病能力的必然操 作，而這種要將孢子懸浮液注入小穗內的操作十分細致，不僅要先剪去穎殼 尖部，還易注射在小穗外，若要將懸浮液全部注射進去，常常需要調整針頭 進入小穗不同的腔或縫隙內，所以在田間進行大量材料的接種有很大的困難； 再次，小麥接種赤霉病菌的最佳時期是抽穗揚花期，這個時期也正是易出現 降雨的季節，在田間進行試驗不能保證環境濕度、溫度和光照起碼的恒定， 使鑒定不夠嚴謹；最后，在實驗數據記錄上除了有田間觀察不便的問題，傳 統的統計方法通常要觀察直至材料完全發病為止，在田間常常需要長達二至 三周的時間，而且要每隔3-5天觀察一次，不僅觀察周期長，次數也多。綜 上，傳統的鑒定方法包括耗時長、操作繁瑣、易污染、不嚴謹等眾多問題， 尤其是在鑒定材料量非常龐大的時候更突顯了這些缺點，所以實驗工具與方 法都需要優化和改進。

發明內容

本發明的目的在于提供一種小麥赤霉病安全快速鑒定方法，以滿足小麥 幼苗抗病害能力的快速鑒定。

為實現上述技術目的，達到上述技術效果，本發明公開了一種小麥赤霉 病安全快速鑒定方法，鑒定方法的具體步驟如下：

禾谷鐮刀菌培養：在25％PDA培養基環境下培養禾谷鐮刀菌7天，切3毫 米見方的帶有菌絲的PDA塊7-10塊，放入150mL2％的綠豆湯培養基，置于搖 床以150rpm的速度培養7天，使其產孢，制作孢子懸浮液，過濾得到孢子， 加入無菌水使其濃度達到5x10⁵個/mL，放4℃冰箱保存；

麥穗離體培養：剪小麥麥穗放入培養盒內(含穗長，長度為23-25cm)， 培養盒內注水，水深4-5cm；每5支麥穗放入一個培養盒內間隔網中；共需培 養5天，可根據實際情況在第三天的時候換水、剪去泡在水中的麥梗部；

抗病實驗：使用異形注射器，采用單花滴注法將10微升孢子懸浮液注射 在麥穗中部小穗，將接種的小麥放入培養盒中，恒溫25℃，恒濕90％，24小 時后將濕度調低至70％，連續培養，記錄第五天數據。

其中，麥穗離體培養中麥穗培養盒為自制培養盒，麥穗培養盒具有多層 結構，包括了培養盒盒體、培養盒盒蓋、培養室、可調節間隔網、恒溫恒濕 組件室、注射器室、溫度-濕度感應器、透氣孔、控制中心，培養盒盒體與培 養盒盒蓋通過鉸鏈連接，培養盒盒體中設置有培養室、恒溫恒濕組件室和注 射器室，恒溫恒濕組件室和注射器室位于培養室下方，溫度-濕度感應器安裝 于培養室內，透氣孔和控制中安裝于培養盒盒蓋內側。

其中，異形注射器注射針內直徑為0.2mm，前口封閉，設置6-8個注射孔 在注射針壁，分布在針壁1.5cm范圍內，注射孔直徑為0.1mm。

其中，鑒定方法還包括有鑒定標準，鑒定標準如下：

0級:沒有可見癥狀；

1級:l個病小穗；

2級:2個病小穗；

3級:3個病小穗；

4級:大于3個病小穗小于1/4的穗面積；

5級:病穗小于l/3的穗面積；

6級:小于1/2的穗面積；

7級:小于2/3的穗面積,梗部輕微變色；

8級:小于3/4的穗面積,局部梗變色；

9級:大于3/4的穗面積,擴展性梗變色,穗枯死；

由所調查的病級計算各品種每次調查的病情指數,具體公式為: