[發明專利]一種檢測診斷主動脈夾層病致病基因的DNA文庫及其應用

有效

• 申請號: 201610004089.8
• 申請日: 2016-01-05
• 公開（公告）號: CN105442052B
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 汪道文;李宗哲
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院
• 主分類號: C40B40/06
• 分類號: C40B40/06;C12Q1/6883;C12Q1/6874
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 謝磊

1.一種基于Ion TorrentTM高通量測序技術診斷主動脈夾層的DNA文庫，其特征在于，該文庫包括33個主動脈夾層致病相關基因，其中，所述33個主動脈夾層致病相關基因如下表所示：

2.權利要求1所述的DNA文庫在制備診斷試劑盒中的應用，其特征在于，所述試劑盒用于診斷主動脈夾層。

3.權利要求1所述的DNA文庫在制備診斷裝置中的應用，其特征在于，所述診斷裝置用于診斷主動脈夾層。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述診斷裝置是測序芯片。

5.如權利要求2-4任一權利要求所述的應用，其特征在于，所述應用包括下列步驟：

(1)提供受試者樣本的基因組DNA；

(2)利用權利要求1所述的DNA文庫從Ion TorrentTM高通量測序平臺自動合成覆蓋全部33個致病基因的擴增引物文庫，對目標區域進行超多重PCR擴增；

(3)對步驟(2)得到的擴增產物進行酶切；

(4)對步驟(3)得到的酶切產物加Barcode接頭；

(5)對步驟(4)得到的連接產物進行純化；

(6)對步驟(5)得到的純化產物用通用引物進行二次擴增；

(7)對步驟(6)得到的二次擴增產物進行片段選擇及濃度測定，即建成患者目標區域擴增文庫；

(8)對步驟(7)所得到的文庫經過油包水PCR擴增反應后，將待測序目的片段連接于ISP珠子，得到反應液；

(9)將步驟(8)得到的包含ISP珠子的反應液點入芯片，上Ion TorrentTM高通量測序進行測序；

(10)將步驟(9)得到的堿基序列信息進行生物信息學比對處理，得到與疾病相關的突變位點；

(11)對步驟(10)得到的突變位點進行Sanger測序法驗證。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述樣本來自受試者的外周血、體液、組織器官樣本。

7.一種診斷試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的DNA文庫。

8.一種診斷裝置，其特征在于，所述裝置包括權利要求1所述的DNA文庫。

9.如權利要求8的診斷裝置，其特征在于，所述診斷裝置是測序芯片。