[發明專利]一種檢測診斷主動脈夾層病致病基因的DNA文庫及其應用

有效

• 申請號: 201610004089.8
• 申請日: 2016-01-05
• 公開（公告）號: CN105442052B
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 汪道文;李宗哲
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院
• 主分類號: C40B40/06
• 分類號: C40B40/06;C12Q1/6883;C12Q1/6874
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 謝磊

本發明公開一種通過靶向高通量半導體測序技術檢測主動脈夾層致病基因突變的DNA文庫及其應用。具體來說，根據33個主動脈夾層致病基因，設計引物池，對樣本基因組DNA進行超多重PCR擴增，擴增產物利用高通量半導體測序技術進行測序，尋找致病突變，為臨床診斷提供遺傳學和分子生物學的理論依據。本發明具有準確、快速、靈活、低成本的特點，本發明涉及的33個基因檢測區域能夠檢測包括：家族性主動脈瘤或夾層(FTAAD)、Marfan綜合征(MFS)、Ehlers?Danlos綜合征(EDS)、Loeys?Dietz綜合征(LDS)以及主動脈扭曲綜合征(ATS)等多種常見主動脈夾層相關疾病，對主動脈夾層的診斷和鑒別診斷有著重要的意義和臨床價值。

技術領域

本發明涉及一種通過靶向高通量半導體測序技術檢測診斷主動脈夾層致病基因的DNA文庫及其應用。具體說是根據主動脈夾層致病基因，設計能覆蓋上述基因外顯子及毗鄰區域的超多重PCR引物，并對樣本基因組DNA進行超多重PCR擴增，擴增產物利用高通量測序技術進行測序，尋找致病突變，明確主動脈夾層的遺傳學病因，為臨床診斷提供遺傳學和分子生物學的理論依據，屬于生物醫學領域臨床檢測技術中的基因檢測技術。

背景技術

主動脈夾層是心血管系統較常見的一種嚴重威脅患者生命安全的主動脈疾病，起病急，預后差，死亡率高，病因復雜，日益受到人們的重視。目前，針對該病尚無治療效果滿意的特異性藥物，因此能否早期篩查診斷出潛在患病人群對于該病的防治就顯得至關重要。

傳統的主動脈夾層診斷主要依靠臨床表現(突發撕裂樣劇烈胸痛或腰腹痛)和傳統生物標記物(平滑肌肌球蛋白重鏈smMHC、鈣調蛋白calponin、彈力蛋白降解產物sELAF、C反應蛋白CRP、DD二聚體D-Dimer)和影像學檢查(經食管超聲心電圖、主動脈超聲、主動脈CT及核磁共振)。然而，臨床上由于主動脈夾層患者出現臨床癥狀的時間差異大，很多患者甚至沒有明顯的胸痛和腰腹痛，首發癥狀即為猝死。傳統生物標記物預測和診斷主動脈夾層特異性差。傳統的影像學檢查診斷方法存在確診時間晚(癥狀出現后)，難以判斷預后等問題。

主動脈夾層既可以獨立發病，也可以作為臨床綜合征的一種表現。與主動脈夾層相關的臨床綜合征有：Marfan綜合征(MFS)、Ehlers-Danlos綜合征(EDS)、Loeys-Dietz綜合征(LDS)以及主動脈扭曲綜合征(ATS)。

隨著測序技術近年來的迅猛發展，人類基因檢測方法變得越來越簡單快捷，檢測成本也日益下降，使得基因診斷應用在臨床一線的常規檢查中成為可能。而且，基因診斷敏感性高，能早期診斷，即：可在癥狀出現前和不可逆病理改變前做出診斷，臨床醫生也可以根據基因型判斷惡性臨床轉歸和預后，早期干預。在各種高通量測序平臺中，新進出現的基于半導體測序技術的擴增子測序以其快速的運行時間，靈活的通量選擇，較低的運行成本和相對簡單的操作方法脫穎而出。

因此，有必要尋求一種新的基于高通量半導體測序技術的檢測主動脈夾層致病基因突變的方法，提高診斷準確率，降低成本和勞動強度并提高時效性。

發明內容

為實現上述目的，本發明提供一種覆蓋包括：家族性主動脈瘤或夾層(FTAAD)、Marfan綜合征(MFS)、Ehlers-Danlos綜合征(EDS)、Loeys-Dietz綜合征(LDS)以及主動脈扭曲綜合征(ATS)等多種常見主動脈夾層相關疾病，包含33個主動脈夾層致病相關基因的DNA文庫。本發明是目前已知檢測主動脈夾層最全面的靶向測序基因檢測試劑盒，33個基因的選擇基于國際已報道和公認的臨床致病基因數據庫(OMIM數據庫、HGMD數據庫、ClinVar數據庫)以及發明者自己的課題研究內容。這33個基因上的致病突變既可以單獨致病，也可以聯合致病導致更加嚴重和復雜的臨床表型，本發明首次做到可以一次性全面的對它們進行測序。其中33個基因及其導致的相關疾病如下：