[發明專利]干細胞材料及制備方法

在審

• 申請號: 201580074529.0
• 申請日: 2015-11-30
• 公開（公告）號: CN107429228A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 阿納托利·安德烈耶維奇·索科洛夫;安東寧娜·伊瓦諾芙娜·科列斯尼科娃;安德烈·伊戈列維奇·多夫吉
• 申請（專利權）人: 輔助性T細胞技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/02;A61K38/18;A61K35/28;A61P17/02
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司11240
• 代理人: 張英

1.保藏于俄羅斯國家工業微生物保藏中心(VKPM)的間充質干細胞系，登錄號為H-154。

2.一種間充質干細胞系，當將0.7×10⁶個細胞接種到75cm²培養瓶中并培養至少96小時時，所述間充質干細胞系具有以下特征中的至少一個：(a)在更換培養基后24小時內，所述細胞產生至少4.5mM的乳酸鹽；(b)在更換培養基后24小時內，所述細胞產生至少150pg/ml的GRO/KC；(c)在更換培養基后24小時后，所述細胞產生低于250pg/ml的OPG；或者(d)在更換培養基后24小時后，所述細胞產生低于80pg/ml的TGF-β3。

3.權利要求2所述的干細胞系，其中所述細胞來源于骨髓。

4.權利要求3所述的干細胞系，其中所述細胞來源于Wistar大鼠的骨髓。

5.權利要求2所述的干細胞系，其中所述細胞在低于7.05的pH時至少進行一次群體倍增。

6.權利要求2所述的干細胞系，其中當將0.7×10⁶個細胞接種到75cm²培養瓶中并培養至少150小時時，所述細胞具有以下附加特征中的至少一個：(e)在更換培養基后24小時內，培養基的pH值降至7.0以下；或者(f)在更換培養基后24小時內，培養基的pH值與不含細胞的培養基的pH值相比下降至少0.4個單位。

7.權利要求6所述的干細胞系，其中所述干細胞在補充有5％CO₂的RPMI-1640培養基中培養。

8.權利要求2所述的干細胞系，其中所述細胞在更換培養基后24小時內產生至少460pg/ml的GRO/KC。

9.權利要求2所述的干細胞系，其中所述細胞在更換培養基后24小時后產生低于90pg/ml的OPG。

10.權利要求2所述的干細胞系，其中所述細胞在更換培養基后24小時后產生低于40pg/ml的TGF-β3。

11.權利要求2所述的干細胞系，具有權利要求2中所述特征中的至少兩個。

12.權利要求2所述的干細胞系，具有權利要求2中所述特征中的至少三個。

13.權利要求2所述的干細胞系，其中所述細胞的特征表現為CD29和CD44標志物的表達呈陽性以及CD11b和CD45標志物的表達呈陰性。

14.權利要求2所述的干細胞系，其中所述細胞中的至少90％表現出2n＝42的核型。

15.一種條件培養基，通過包括以下步驟的方法制備：

提供培養基；

將來自權利要求1所述的干細胞系的多個干細胞在培養基中保持一個調節期，從而調節所述培養基；以及

收集條件培養基。

16.一種條件培養基，通過包括以下步驟的方法制備：

提供培養基；

將權利要求2所述的細胞在培養基中保持一個調節期，從而調節培養基；以及

收集條件培養基。

17.權利要求16所述的條件培養基，其中所述培養基是補充有5％CO₂的RPMI-1640。

18.權利要求16所述的條件培養基，其中所述細胞保持在CO₂的大氣濃度下。

19.權利要求16所述的條件培養基，其中所述細胞保持在缺氧條件下。

20.權利要求16所述的條件培養基，其中所述細胞來源于Wistar大鼠的骨髓。

21.權利要求16所述的條件培養基，其中所述調節期為至少12小時。

22.權利要求16所述的條件培養基，其中所述調節期是足以使條件培養基含有至少150pg/mL的GRO/KC的時間段。

23.一種條件培養基，包含：由多個間充質干細胞調節的培養基，其中所述條件培養基包含以下中的至少一種：(a)至少500pg/mL的GRO/KC；(b)至少4000pg/ml VEGF；(c)低于250pg/ml的OPG；或者(d)低于80pg/ml的TGF-β3。