[發(fā)明專利]用于減少核酸擴(kuò)增抑制的組合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580069431.6
• 申請(qǐng)日: 2015-12-21
• 公開（公告）號(hào): CN107109402B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 格雷戈里·W·西頓;尼爾·帕西
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 3M創(chuàng)新有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6844
• 代理公司: 中原信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11219
• 代理人: 王潛;郭國(guó)清

本發(fā)明提供了用于減少污染物對(duì)核酸擴(kuò)增的抑制作用的組合物。組合物包含有效量的三價(jià)鐵、有機(jī)鐵螯合試劑和非離子表面活性劑。任選地，組合物包含聚乙烯吡咯烷酮。該組合物的pH為約8.45至8.85。有機(jī)鐵螯合試劑具有相對(duì)于三價(jià)鐵的大于或等于10^4.2的第一親和常數(shù)以及相對(duì)于鎂的小于10^3.8的第二親和常數(shù)。第一親和常數(shù)和第二親和常數(shù)是在pH是8.45和20℃下的去離子水中確定的。本發(fā)明還提供使用該組合物以制備用于核酸擴(kuò)增的試樣的方法。

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求2014年12月23日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)62/096,217和2015年3月23日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)62/136,682的優(yōu)先權(quán)，這些臨時(shí)申請(qǐng)的公開內(nèi)容全文以引用方式并入本文。

背景技術(shù)

用于檢測(cè)病原體和其它微生物的常規(guī)方法是基于培養(yǎng)的方法，但是這些方法是耗時(shí)的、費(fèi)力的，并且不再符合質(zhì)量控制和診斷實(shí)驗(yàn)室提供快速的結(jié)果的需求。

克服培養(yǎng)微生物、在病原體檢測(cè)中的假陽(yáng)性等問(wèn)題的努力已經(jīng)引起了諸如基于DNA的診斷方法或核酸增殖方法的基因測(cè)試的開發(fā)。使用基于DNA的方法來(lái)源于每種病原體物種攜帶將其與其它生物體區(qū)分開的獨(dú)特的DNA或RNA標(biāo)記的前提。這些技術(shù)是最有前途的，并且越來(lái)越多地用于微菌的快速、敏感和特異性檢測(cè)。

生物技術(shù)的進(jìn)步已經(jīng)引起各種各樣的用于有效的核酸擴(kuò)增的測(cè)定的開發(fā)。

含有微生物/病原體的試樣的有效基因檢測(cè)需要快速敏感的測(cè)定方法，其給出即時(shí)或?qū)崟r(shí)的結(jié)果。分析和抑制由試樣中的抑制物質(zhì)引起的核酸擴(kuò)增的時(shí)間和敏感性與基因測(cè)試的有用性有某些限制。

希望具有有效地且快速地減少或消除預(yù)期目標(biāo)的核酸擴(kuò)增的抑制的組合物和方法。

發(fā)明內(nèi)容

本公開提供了用于消除核酸擴(kuò)增反應(yīng)中的試樣抑制的組合物以及使用該組合物的核酸擴(kuò)增方法。

在第一方面，提供了用于消除核酸擴(kuò)增反應(yīng)中的試樣抑制的含水組合物。組合物可以包含有機(jī)鐵螯合試劑、三價(jià)鐵和濃度大于或等于0.005％(質(zhì)量/體積)的非離子表面活性劑。組合物可以具有約8.45至8.85的pH。有機(jī)鐵螯合試劑可以具有相對(duì)于三價(jià)鐵的大于或等于10^4.2的第一親和常數(shù)以及相對(duì)于鎂的小于10^3.8的第二親和常數(shù)，其中第一親和常數(shù)和第二親和常數(shù)是在pH是8.45和20℃下的去離子水中確定的。

在任何上述實(shí)施方案中，有機(jī)鐵螯合試劑可以包含多個(gè)羧酸根基團(tuán)。在任何上述實(shí)施方案中，組合物還可包含2-羥基丙烷-1,2,3-三羧酸酯。在任何上述實(shí)施方案中，有機(jī)鐵螯合試劑可以包括EGTA，其中三價(jià)鐵與EGTA的摩爾比為約0.04至約0.28。在任何上述實(shí)施方案中，組合物還可包含聚乙烯吡咯烷酮。

在第二方面，本公開提供了核酸擴(kuò)增方法，所述方法包括：a)使包含有機(jī)鐵螯合試劑、三價(jià)鐵、聚乙烯吡咯烷酮和非離子表面活性劑的組合物與目標(biāo)試樣接觸以形成含水混合物，其中含水混合物的pH為約8.45至8.85，其中非離子表面活性劑以大于或等于0.005％(質(zhì)量/體積)的濃度存在于組合物中；b)使步驟a)的含水混合物經(jīng)歷熱裂解；以及c)在步驟b)之后，使含水混合物經(jīng)歷等溫核酸擴(kuò)增。有機(jī)鐵螯合試劑具有相對(duì)于三價(jià)鐵的大于或等于10^4.2的第一親和常數(shù)以及相對(duì)于鎂的小于10^3.8的第二親和常數(shù)，其中第一親和常數(shù)和第二親和常數(shù)是在pH是8.45和20℃下的去離子水中確定的。