[發明專利]用于減少核酸擴增抑制的組合物

有效

• 申請號: 201580069431.6
• 申請日: 2015-12-21
• 公開（公告）號: CN107109402B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 格雷戈里·W·西頓;尼爾·帕西
• 申請（專利權）人: 3M創新有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6844
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 王潛;郭國清

1.一種用于消除等溫核酸擴增反應中的試樣抑制的含水組合物，所述含水組合物包含：

有機鐵螯合試劑；

三價鐵；以及

非離子表面活性劑，所述非離子表面活性劑的濃度大于或等于0.005％(質量/體積)；

其中所述含水組合物的pH為8.45至8.85；

其中所述有機鐵螯合試劑具有相對于三價鐵的大于或等于10^4.2的第一親和常數以及相對于鎂的小于10^3.8的第二親和常數，其中所述第一親和常數和所述第二親和常數是在pH是8.45和20℃下的去離子水中確定的。

2.根據權利要求1所述的含水組合物，其中所述有機鐵螯合試劑選自：乙二醇-雙(2-氨基乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸；N,N,N',N'-四(2-吡啶基甲基)乙烷-1,2-二胺；1,2-雙(鄰氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸；N-(2-羥乙基)乙二胺-N,N′,N′-三乙酸；以及它們的鹽。

3.根據權利要求1所述的含水組合物，其中所述有機鐵螯合試劑包括EGTA，其中三價鐵與所述EGTA的摩爾比為0.04至0.28。

4.根據權利要求1所述的含水組合物，所述含水組合物還包含2-羥基丙烷-1,2,3-三羧酸酯，其中所述有機鐵螯合試劑和所述2-羥基丙烷-1,2,3-三羧酸酯是不同的分子。

5.根據權利要求1所述的含水組合物，其中所述非離子表面活性劑的親水-親脂平衡值是11至16。

6.根據權利要求1所述的含水組合物，其中所述非離子表面活性劑以至多0.3％(質量/體積)的濃度存在。

7.根據權利要求1所述的含水組合物，其中所述三價鐵以50μM至350μM的濃度溶解在所述含水組合物中。

8.根據權利要求1所述的含水組合物，所述含水組合物還包含聚乙烯吡咯烷酮。

9.根據權利要求1所述的組合物，所述組合物還包含含氟表面活性劑。

10.根據權利要求1所述的組合物，所述組合物還包含指示劑染料。

11.一種等溫核酸擴增方法，所述方法包括：

a)使權利要求1所述的組合物與目標試樣接觸以形成含水混合物；

b)使步驟a)的含水混合物經歷熱裂解過程；以及

c)在步驟b)之后，使所述含水混合物的一部分經歷等溫核酸擴增過程。

12.根據權利要求11所述的方法，其中等溫核酸擴增過程包括環介導的等溫擴增。

13.根據權利要求11所述的方法，其中所述組合物還包含緩沖劑和促進LAMP-BART反應的增強劑。

14.根據權利要求11所述的方法，其中使所述混合物經歷熱裂解包括將所述混合物加熱至100℃保持15分鐘，其中將冷卻的裂解物加入到用于等溫擴增的對照LAMP-BART球粒。

15.一種試劑盒，所述試劑盒包含：

有機鐵螯合試劑；

三價鐵；

非離子表面活性劑；并且

其中所述有機鐵螯合試劑具有相對于三價鐵的大于或等于10^4.2的第一親和常數以及相對于鎂的小于10^3.8的第二親和常數，其中所述第一親和常數和所述第二親和常數是在pH是8.45和20℃下的去離子水中確定的。