[發明專利]用于檢測高毒力艱難梭菌菌株的存在的方法

有效

• 申請號: 201580069412.3
• 申請日: 2015-12-18
• 公開（公告）號: CN107110864B
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: J.基爾維斯卡里;J.庫爾克拉
• 申請（專利權）人: 分子診斷有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.引物組在制備用于進行在生物樣品中檢測高毒力艱難梭菌(Clostridiumdifficile)菌株的存在的方法的試劑盒中的用途，所述方法包括：

進行核酸擴增反應，其包含自所述生物樣品提取的DNA作為模板、在所述反應中引發和擴增艱難梭菌hydR基因中目標序列的第一寡核苷酸引物組、和在所述反應中引發和擴增對應于SEQ ID NO:2所列的艱難梭菌序列的目標序列的第二寡核苷酸引物組，其中所述hydR基因包含對應于SEQ ID NO:1的序列，其中所述第一寡核苷酸引物組含有包含如SEQ IDNO:3所列的核苷酸序列的寡核苷酸，以及包含如SEQ ID NO:4所列的核苷酸序列的寡核苷酸，和

其中所述第二寡核苷酸引物組含有包含如SEQ ID NO:5所列的核苷酸序列的寡核苷酸，以及包含如SEQ ID NO:6所列的核苷酸序列的寡核苷酸。

2.根據權利要求1的用途，其包括在所述生物樣品中檢測高毒力艱難梭菌菌株存在的步驟，其中當所述第一寡核苷酸引物組不擴增出特異性產物并且所述第二寡核苷酸引物組擴增出特異性產物時，在所述樣品中檢出所述高毒力艱難梭菌菌株。

3.根據權利要求1或2的用途，其中所述高毒力艱難梭菌菌株是艱難梭菌菌株027或者027-核糖核酸型-類似艱難梭菌菌株(027-ribotype-resembling Clostridium difficilestrain)。

4.根據權利要求1或2的用途，其中所述樣品中艱難梭菌hydR基因DNA的存在指示艱難梭菌菌株027不存在于所述樣品中。

5.根據權利要求1或2的用途，其中對于所述第一寡核苷酸引物組的艱難梭菌特異性目標序列是如SEQ ID NO:1所列的艱難梭菌hydR基因的核苷酸區域，并且所述核苷酸區域的至少部分被特異性擴增。

6.根據權利要求5的用途，其中所述第一寡核苷酸引物組含有由如SEQ ID NO:3所列的核苷酸序列組成的寡核苷酸，以及由如SEQ ID NO:4所列的核苷酸序列組成的寡核苷酸。

7.根據權利要求1或2的用途，其中通過使用包含如SEQ ID NO:7所列的核苷酸序列或由如SEQ ID NO:7所列的核苷酸序列組成的探針來檢測所述第一寡核苷酸引物組擴增的目標序列的存在。

8.根據權利要求7的用途，其中通過使用由如SEQ ID NO:7所列的核苷酸序列組成的探針來檢測所述第一寡核苷酸引物組擴增的目標序列的存在。

9.根據權利要求1的用途，其中所述第二寡核苷酸引物組含有由如SEQ ID NO:5所列的核苷酸序列組成的寡核苷酸，以及由如SEQ ID NO:6所列的核苷酸序列組成的寡核苷酸。

10.根據權利要求1的用途，其中通過使用包含SEQ ID NO:8或9所列的核苷酸序列或由SEQ ID NO:8或9所列的核苷酸序列組成的探針來檢測用所述第二寡核苷酸引物組擴增的目標序列的存在。

11.根據權利要求1的用途，其中所述擴增反應還包含在所述反應中對于擴增艱難梭菌毒素B基因(tcdB)特異性的第三寡核苷酸引物組，并且在所述反應中特異性擴增出如SEQID NO:10所列的核苷酸區域的至少部分。

12.根據權利要求11的用途，其中所述第三寡核苷酸引物組含有由如SEQ ID NO:11所列的核苷酸序列組成的寡核苷酸，以及由如SEQ ID NO:12所列的核苷酸序列組成的寡核苷酸。

13.根據權利要求11的用途，其中通過使用包含如SEQ ID NO:13所列的核苷酸序列或由如SEQ ID NO:13所列的核苷酸序列組成的探針來檢測所述第三寡核苷酸引物組擴增的目標序列的存在。