[發明專利]碳酸酐酶IX特異性嵌合抗原受體及其使用方法

在審

• 申請號: 201580068869.2
• 申請日: 2015-12-21
• 公開（公告）號: CN108064251A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: W.A.馬拉斯科
• 申請（專利權）人: 達納－法伯癌癥研究所公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍;羅文鋒

本發明提供了對碳酸酐酶IX（CAIX）特異性的嵌合抗原受體細胞及其用于治療表達CAIX的癌癥如腎細胞癌的方法。

相關申請

本申請要求2014年12月19日提交的美國臨時申請號62/094,596的優先權和利益，其內容通過引用整體并入本文。

序列表的通過引用并入

于2015年12月21日創建的命名為“DFCI-092_001WO Final Seq Listing_ST25.txt”的文本文件的內容通過引用整體并入本文。

發明領域

本發明總的來說涉及對碳酸酐酶IX（CAIX）特異性的嵌合抗原受體細胞及其用于治療表達CAIX的癌癥如腎細胞癌的方法。

政府利益

本發明是利用由美國國立衛生研究院（National Institutes of Health）頒發的撥款號R21DK07228的政府支持作出的。政府對發明享有一定的權利。

發明背景

碳酸酐酶是鋅金屬酶的家族，其催化二氧化碳的可逆水合以維持活生物體中的pH平衡。碳酸酐酶IX（CAIX）是分子量為54/58kDa的跨膜糖蛋白。在結構上，CAIX由四個結構域組成：N-末端蛋白聚糖樣結構域（PG）（aa 53-111）、CA催化結構域（CA）（aa 135-391）、跨膜螺旋區段（aa 415-434）和短的胞質內尾（aa 434-459）。在含氧量低的條件下，CAIX基因在轉錄水平由低氧誘導型轉錄因子HIF-1α直接活化，從而導致質子轉運至細胞外培養基并降低pH。因此，CAIX表達可以被認為是各種腫瘤中低氧的替代標記。通過CA活性導致的腫瘤微環境酸化和CAIX的PG結構域中O-聯聚糖結構中的硫酸角蛋白單位被推測在細胞黏附和腫瘤進展過程中起重要作用。

CAIX被認為是腫瘤相關抗原，且發現其在幾種實體瘤類型中超表達，特別是在透明細胞型腎細胞癌（RCC）以及幾種組織學類型的癌中，包括卵巢、乳腺、食管、膀胱、結腸、非小細胞肺、子宮頸發育不良等。已經提出CAIX表達可作為癌癥診斷和早期檢測致癌作用的標記；它也是IL-2治療的黑素瘤和腎癌患者中有利反應的預后標記，從而導致高反應率和低毒性。免疫染色和蛋白質印跡研究已經表明，高水平的CAIX表達限于大多數原發性RCC（具有顆粒或紡錘狀細胞的透明細胞型，嗜色細胞和集合管乳頭狀型，嫌色細胞除外）、囊性RCC和轉移性RCC，但在正常腎組織、良性上皮囊性病變或非腎細胞透明細胞腺癌中未觀察到。

除了黑素瘤外，RCC是兩種免疫原性腫瘤類型之一，其表現出腎切除術后轉移性病灶自發消退的跡象，以及對免疫調諧療法如癌癥疫苗和IL-2有反應的跡象。使用先體外后體內擴增的腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）的轉移性黑素瘤和RCC患者的過繼T-細胞療法已經顯示了一些成功。最近，TCR-修飾的T細胞（TCR α和β鏈）也用于提供有效的腫瘤靶向T-細胞譜。然而，靶向后抗腫瘤活性可能受到包括下述的缺陷的阻礙：MHC I類限制性抗原呈遞機制的所有水平的下調、由于共刺激分子在腫瘤上的表達喪失引起的誘導的無反應性以及由腫瘤釋放分子和分泌具有免疫抑制活性的細胞因子。

發明概述

在各個方面，本發明提供了具有細胞內信號傳導結構域、跨膜結構域和包含碳酸酐酶IX（G250）-特異性受體的細胞外結構域的嵌合抗原受體（CAR）。在一些方面，CAR還包括位于細胞外結構域和跨膜結構域之間的莖區。跨膜結構域是例如CD28。在其它方面，CAR還包括位于跨膜結構域和細胞內信號傳導結構域之間的一種或多種附加共刺激分子。共刺激分子是例如CD28、4-1BB、ICOS或OX40。細胞內信號傳導結構域包括CD3 ζ鏈。