[發明專利]采用分選酶的酶介導多肽綴合新方法

有效

• 申請號: 201580068354.2
• 申請日: 2015-12-14
• 公開（公告）號: CN107001447B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: M·伯尼茨-杜拉特;P·克拉奇;M·沙特
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 凌立;黃革生

1.用于產生兩條多肽的酶促綴合產物的方法，包括以下步驟：

-孵育

i)含有如SEQ ID NO:20所示的其中X可以是任意氨基酸殘基的氨基酸序列LPXTG的第一多肽；

ii)i)在其N端含有丙氨酰基化合物、或ii)含有SEQ ID NO:26所示的寡聚丙氨酸AA、SEQ ID NO:27所示的AAA、SEQ ID NO:28所示的AAAA、或SEQ ID NO:29所示的AAAAA，或iii)在其N端含有半胱氨酸殘基后接著1至3個丙氨酸殘基的第二多肽；

iii)具有分選酶活性的第三多肽，所述多肽具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列；和

-從反應混合物回收綴合物，從而產生兩條多肽的酶促綴合產物。

2.權利要求1的方法，其中第一多肽在其C端包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列LPXTG，其中X可以是任意氨基酸殘基。

3.權利要求2的方法，其中第一多肽在其C端包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列LPETG。

4.權利要求1至3中任一項的方法，其中第二多肽在其N端具有SEQ ID NO:26或SEQ IDNO:27的寡聚丙氨酸。

5.權利要求1至3中任一項的方法，其中第一多肽是肽，其包含SEQ ID NO:20所示的其中X可以是任意氨基酸殘基的氨基酸序列LPXTG、接頭和非分選酶基序部分。

6.權利要求1至3中任一項的方法，其中第一多肽選自抗體可變結構域、抗體的Fab片段、抗體Fc區和標記。

7.權利要求1至3中任一項的方法，其中第二多肽選自抗體可變結構域、抗體的Fab片段、抗體Fc區和標記。