[發明專利]用于俘獲核酸的方法

有效

• 申請號: 201580067328.8
• 申請日: 2015-12-02
• 公開（公告）號: CN107002147B
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發明（設計）人: J.R.內爾森;B.李
• 申請（專利權）人: 環球生命科學解決方案運營英國有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6816;C12N15/10;G01N33/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;周李軍

本文提供一種方法，其中俘獲靶核酸的方法包括將核酸俘獲探針施加至需要定義的俘獲區，其中具有第一分子量的核酸俘獲探針至少包含與靶核酸序列的至少一部分互補的序列，且核酸俘獲探針基本固定在基質的俘獲區上。所述方法進一步包括將包含具有第二分子量的靶核酸的樣品施加至基質的樣品施加區；其中包含靶核酸的樣品通過側向流動流經從樣品施加區至俘獲區的一段基質，且靶核酸通過與俘獲區雜交被核酸俘獲探針俘獲。

相交申請的交叉引用

本申請是2014年7月1日提交的名為“Method, Substrate and Device forSeparating Nucleic Acid (用于分離核酸的方法、基質和裝置)”的美國專利申請號14/321160的部分繼續申請，其通過引用結合到本文中。

本發明在美國國防部高級研究計劃局(Defense Advanced Research ProjectsAgency，DARPA)授予的資助號HR0011-11-2-0007的政府支持下完成。政府在本發明中享有一定權利。

發明領域

本發明總的來說涉及從生物樣品中分離靶核酸的方法。本發明還涉及使用核酸俘獲探針通過側向流動俘獲靶核酸的方法。

發明背景

樣品中核酸的分離、檢測和濃縮對于例如基礎研究、法醫和診斷應用、感測、基因組測序等各種應用是最基本的要求。涉及核酸的各種應用之前通常是將靶核酸從不需要的核酸和污染物中分離和純化以降低對下游應用的干擾并達到所需結果。技術包括凝膠電泳、毛細管電泳或微型流體裝置或微型分析裝置中的電泳，它們是分子和細胞生物學中能夠分離和純化特定核酸的主流技術。傳統的純化或分離方法和相關技術是耗費時間的和勞動密集的。

核酸的檢測在多種應用中具有極大重要性，包括但不限于診斷應用、法醫分析、基因組測序、臨床研究和生物制藥學研究。各種檢測探針目前被用于測定正常和/或異常條件下、基因組篩查中的基因表達以預測各種遺傳病癥、檢測個體中突變基因(例如致癌基因)的存在或鑒定感染性生物(例如細菌和病毒)的存在。然而，特異性、選擇性和分辨率的缺乏仍是目前所用核酸檢測系統的主要障礙。為了達到靶核酸或檢測探針的所需濃度，已開發了多種技術，這可包括靶分子的擴增或俘獲探針的擴增，然而這些方法需要額外的擴增步驟以提高檢測系統的靈敏度。

已開發了使用基質從液體樣品中分離和/或檢測核酸的各種技術，其包括：通過使樣品沿吸水膜流動以沿膜的長度分布，從樣品中分離核酸。使用在膜上交聯的俘獲探針，進一步俘獲分離的核酸。在另一種方法中，分離至少二種細胞組分(例如基因組DNA、RNA和蛋白質)，其中將包括細胞組分的水性溶液施加到多種固體基質上接著洗滌。這些方法是耗時和復雜的，因為它們需要多個步驟(例如洗滌或洗脫)或多種基質。在許多的這些方法中，基質的洗滌是重要的步驟；然而，如果探針不與基質交聯，則洗滌可稀釋俘獲探針或將其從基質中除去。

十分需要從復雜樣品中分離核酸用于后繼分析的簡化方法。當生物樣品的量較少時，例如從活檢樣品中獲得的樣品或收集用于法醫應用的樣品，尤其需要核酸的同時俘獲、分離、擴增、濃縮和檢測。核酸使用的增加需要快速、簡單和可靠的用于分離和檢測核酸的方法。

發明簡述

在一個實施方案中，提供俘獲靶核酸的方法，其中所述方法包括將核酸俘獲探針施加至基質的俘獲區，其中具有第一分子量的核酸俘獲探針至少包含與靶核酸序列的至少一部分互補的序列，且核酸俘獲探針基本固定在基質的俘獲區上；將包含具有第二分子量的靶核酸的樣品施加至基質的樣品施加區；其中包含靶核酸的樣品通過側向流動流經從樣品施加區至俘獲區的一段基質，靶核酸在俘獲區通過雜交被核酸俘獲探針俘獲，其中核酸俘獲探針是滾環擴增(RCA)產物。