[發(fā)明專(zhuān)利]整合轉(zhuǎn)基因的位點(diǎn)定向CRISPR/重組酶組合物和方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580064960.7
• 申請(qǐng)日: 2015-12-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107208079B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R·雁如·蔡
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 應(yīng)用干細(xì)胞有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N9/22
• 分類(lèi)號(hào): C12N9/22;C12N15/113
• 代理公司: 北京市君合律師事務(wù)所 11517
• 代理人: 顧云峰;吳龍瑛

1.一種多肽，其包含：

(i)能夠結(jié)合向?qū)NA的失去催化能力的CRISPR-Cas結(jié)構(gòu)域，其氨基酸序列是在SEQ IDNO:1上進(jìn)行D10A突變和選自H840A、N854A、N863A和其組合的第二突變后獲得的序列，其中所述向?qū)NA能夠與靶DNA序列雜交；和

(ii)包含絲氨酸重組酶的重組酶結(jié)構(gòu)域，其中所述重組酶結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列是SEQID NO:5或SEQ ID NO:5變體，所述SEQ ID NO:5變體中的突變?yōu)橐韵峦蛔兘M合之一：(1)I77L，I3P和V108A；(2)I77L和L135R；(3)I77L，S12R和I103V；(4)I77L和E132A；(5)I77L，I3L和L135R；(6)I77L，I3S和E132A；或(7)I77L，N127H和E132A。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，還包含連接CRISPR-Cas結(jié)構(gòu)域和重組酶結(jié)構(gòu)域的接頭。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多肽，其中所述接頭具有蘇氨酸-絲氨酸的氨基酸序列。

4.一種組合物，其包含權(quán)利要求1所述的多肽和向?qū)NA。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，還包含供體DNA，所述供體DNA包含由所述絲氨酸重組酶識(shí)別的第一核苷酸序列和轉(zhuǎn)基因。

6.一種組合物，其包含：

(i)編碼權(quán)利要求1所述多肽的第一核苷酸序列；和

(ii)編碼向?qū)NA的第二核苷酸序列；

其中所述第一和第二核苷酸位于相同或不同的載體上。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，還包含供體DNA，所述供體DNA包含由所述絲氨酸重組酶識(shí)別的第一核苷酸序列和轉(zhuǎn)基因。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，還包含編碼所述絲氨酸重組酶的第三核苷酸序列。

9.將轉(zhuǎn)基因整合到細(xì)胞基因組中的非疾病診斷和治療目的的方法，包括將權(quán)利要求6所述的組合物引入非人細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述組合物還包含編碼所述絲氨酸重組酶的第三核苷酸序列。

11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述非人細(xì)胞是真核細(xì)胞。

12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述非人細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述非人細(xì)胞是單細(xì)胞胚胎。