[發(fā)明專利]用于識別、富集和/或擴(kuò)增抗原特異性T細(xì)胞的試劑和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580063354.3
• 申請日: 2015-09-17
• 公開（公告）號: CN107002038B
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·施內(nèi)克;K·佩里察;J·格里克比埃勒;M·奧爾基
• 申請（專利權(quán)）人: 約翰·霍普金斯大學(xué)
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C07K16/28;C07K16/00;B03C1/28;B03C1/01;C12N13/00;G01N33/543
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 王永偉;趙蓉民

包括天然T細(xì)胞并且包括稀少前驅(qū)細(xì)胞的抗原特異性T細(xì)胞在培養(yǎng)液中富集和擴(kuò)增。富集和擴(kuò)增提供通過過繼轉(zhuǎn)移用于更有效的免疫治療的平臺，以及通過測定與候選肽抗原的庫的T細(xì)胞反應(yīng)性用于個性化免疫治療的平臺。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請的主題涉及免疫治療，并且涉及公開于2014年3月13日提交的PCT/US2014/25889中的主題，其中的內(nèi)容以引入方式并入。

背景技術(shù)

抗原特異性T細(xì)胞的擴(kuò)增因抗原特異性幼稚前體的稀有性而復(fù)雜，其可僅為百萬分之一。為了產(chǎn)生過繼治療所需要的大量的腫瘤特異性T細(xì)胞(例如)，淋巴細(xì)胞通常用抗原刺激多周，常常接著在勞動密集過程中的T細(xì)胞選擇和亞克隆。

出于治療和診斷目的兩者，存在對可從幼稚前體快速產(chǎn)生大量和高頻率抗原特異性T細(xì)胞，或快速識別T細(xì)胞應(yīng)答以候選肽抗原的技術(shù)的需要。

發(fā)明內(nèi)容

在各種方面，本發(fā)明提供在培養(yǎng)液中，包括從幼稚T細(xì)胞并且包括從稀少前驅(qū)細(xì)胞快速富集和擴(kuò)增抗原特異性T細(xì)胞。本發(fā)明由此提供用于更有效免疫治療(例如通過過繼轉(zhuǎn)移)的平臺。本發(fā)明通過確定對候選肽抗原庫的T細(xì)胞反應(yīng)性，進(jìn)一步提供用于快速識別來自患者淋巴細(xì)胞的抗原特異性T細(xì)胞應(yīng)答的平臺和用于個性化免疫治療的平臺。

在各種實(shí)施例中本發(fā)明采用納米級人工抗原呈遞細(xì)胞(aAPC)，其捕獲刺激信號并且將其傳遞到免疫細(xì)胞，如抗原特異性T淋巴細(xì)胞，如CTL。存在于aAPC上的信號可包括信號1，在主要組織相容性復(fù)合體(MHC)的情形下呈遞的抗原肽(I類或II類)；以及信號2，調(diào)節(jié)T細(xì)胞應(yīng)答的一種或多種共刺激配體。在一些實(shí)施例中信號2為通過CD28結(jié)合并且活化的配體。在各種實(shí)施例中，粒子材料為順磁性的并且優(yōu)選地為生物兼容性的，如聚葡萄糖涂布的氧化鐵粒子。順磁性的粒子允許磁性捕獲或通過施加磁場“富集”，以及在富集的細(xì)胞部分內(nèi)活化和后續(xù)擴(kuò)增抗原特異性淋巴細(xì)胞，其另外通過施加磁場增強(qiáng)。

在一些方面，本發(fā)明提供用于制備抗原特異性T細(xì)胞群的方法。所述方法包含提供包含來自患者的T細(xì)胞的樣品。在一些實(shí)施例中，患者需要抗原特異性T細(xì)胞的過繼轉(zhuǎn)移。樣品可為PBMC樣品，或通過白細(xì)胞去除術(shù)獲得的樣品。樣品可富集所關(guān)注的T細(xì)胞，如CD8+T細(xì)胞和/或幼稚T細(xì)胞。含有T細(xì)胞的樣品與呈遞所關(guān)注的疾病(例如腫瘤型)常見的抗原和/或呈遞基于個人化選擇的一種或多種抗原的順磁性aAPC的群接觸。在某些實(shí)施例中，每個aAPC珠粒呈遞單個抗原，并且各自呈遞不同抗原的aAPC珠粒的混合液用于富集/擴(kuò)增。順磁性特性用于通過鄰近放置磁體針對特異性T細(xì)胞捕獲或“富集”抗原樣品以由此分離aAPC-締合細(xì)胞與非締合細(xì)胞?；厥盏腡細(xì)胞可通過具有aAPC的培養(yǎng)液體外擴(kuò)增，并且抗原特異性細(xì)胞的擴(kuò)增通過磁場的存在進(jìn)一步增強(qiáng)。富集和擴(kuò)增過程可重復(fù)一次或多次，用于抗原特異性細(xì)胞的理想擴(kuò)增(以及進(jìn)一步純化)。

在某些實(shí)施例中，所述方法提供抗原特異性T細(xì)胞的約1000至10,000倍擴(kuò)增(或更多)，其中大于約10⁸抗原特異性T細(xì)胞在例如1至3周里產(chǎn)生。所得細(xì)胞可向患者給藥以治療疾病?？乖禺愋灶l率為在轉(zhuǎn)移之后對于理想擴(kuò)增的獨(dú)特重要的參數(shù)，因?yàn)楦偁巵碜詿o關(guān)的共同轉(zhuǎn)移的細(xì)胞的生長信號可顯著減弱所關(guān)注的抗腫瘤T細(xì)胞的動態(tài)平衡擴(kuò)增。

在另外其它方面，本發(fā)明提供用于基于個人化選擇T細(xì)胞抗原的方法。舉例來說，各自呈遞候選抗原肽的aAPC的陣列或庫用來自受試者或患者的T細(xì)胞篩選，并且確定或定量T細(xì)胞對每個aAPC-肽的應(yīng)答。T細(xì)胞應(yīng)答可例如通過細(xì)胞因子表達(dá)或T細(xì)胞活化的其它替代標(biāo)記的表達(dá)定量。示例性的測定平臺包括免疫化學(xué)，如ELISA，或已表達(dá)基因的擴(kuò)增，例如通過RT-PCR。在其它實(shí)施例中，T細(xì)胞活化通過測量指示T細(xì)胞活化(如鈣信號傳遞)的胞內(nèi)信號傳遞事件定量。此類測定可采用本領(lǐng)域中已知的任何多種比色測定。