[發(fā)明專利]用于識(shí)別、富集和/或擴(kuò)增抗原特異性T細(xì)胞的試劑和方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580063354.3
• 申請(qǐng)日: 2015-09-17
• 公開（公告）號(hào): CN107002038B
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·施內(nèi)克;K·佩里察;J·格里克比埃勒;M·奧爾基
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 約翰·霍普金斯大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783;C07K16/28;C07K16/00;B03C1/28;B03C1/01;C12N13/00;G01N33/543
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 王永偉;趙蓉民

1.一種用于制備抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）群的方法，其包含：

提供來(lái)自患者或合適供體的包含幼稚T細(xì)胞的樣品，所述樣品富集CD8+細(xì)胞；

使所述樣品與為順磁性的并且在表面上包含MHC I類肽抗原呈遞復(fù)合物和通過(guò)CD28結(jié)合和活化的淋巴細(xì)胞共刺激配體的粒子的群體接觸，其中所述粒子的直徑為約10 nm到約500 nm，并且所述抗原呈遞復(fù)合物呈遞腫瘤相關(guān)的抗原；

使帶有所述粒子的群體的所述樣品通過(guò)磁性富集塔，從而同時(shí)富集和活化所述樣品中的抗原特異性T細(xì)胞，并驅(qū)使T細(xì)胞受體集群，

回收與所述順磁性粒子締合的細(xì)胞，以及

在培養(yǎng)液中將回收的細(xì)胞擴(kuò)增1-3周，以制備抗原特異性CTL群，所述抗原特異性T細(xì)胞群具有至少約10⁸個(gè)對(duì)所述肽抗原具有特異性的CTL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述患者為癌癥患者。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述癌癥為實(shí)體腫瘤。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述癌癥為黑素瘤、結(jié)腸癌、十二指腸癌、前列腺癌、乳癌、卵巢癌、導(dǎo)管癌、肝癌、胰腺癌、腎癌、子宮內(nèi)膜癌、睪丸癌、胃癌、發(fā)育異常的口腔黏膜、息肉病、頭頸癌、侵襲性口腔癌、非小細(xì)胞肺癌瘤、小細(xì)胞肺癌、間皮瘤、過(guò)渡和鱗狀細(xì)胞泌尿癌瘤、腦癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和神經(jīng)膠質(zhì)瘤。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述癌癥為黑素瘤。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述癌癥為血液惡性病。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述患者患有傳染病。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中包含T細(xì)胞的所述樣品來(lái)自與過(guò)繼轉(zhuǎn)移受體HLA匹配的合適的供體。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中包含T細(xì)胞的所述樣品是外周血單核細(xì)胞（PBMC）樣品。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中包含T細(xì)胞的所述樣品來(lái)自骨髓、淋巴結(jié)組織、脾臟組織或腫瘤。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中包含T細(xì)胞的所述樣品通過(guò)白細(xì)胞去除術(shù)分離。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中表面上包含MHC I類肽抗原呈遞復(fù)合物的所述順磁性粒子包含右旋糖酐鐵珠粒。

13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗原呈遞復(fù)合物為單體或二聚的。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述抗原呈遞復(fù)合物為二聚的，其中所述復(fù)合物包含通過(guò)二硫鍵締合的MHC與免疫球蛋白重鏈序列的融合物。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述免疫球蛋白重鏈序列為IgG序列。

16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述MHC為包含HLA-A、HLA-B、HLA-C或HLA-E的MHCI類復(fù)合物。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述MHC為HLA-A2。

18.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述免疫球蛋白重鏈序列為人類化單克隆抗體序列。

19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述共刺激配體選自由以下各項(xiàng)組成的群組：?jiǎn)慰寺】贵w、F(ab’)2、Fab、scFv和單鏈抗體。

20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述單克隆抗體為人類化的。