[發明專利]突變的免疫球蛋白結合多肽

有效

• 申請號: 201580062170.5
• 申請日: 2015-11-16
• 公開（公告）號: CN107001432B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: G.羅德里戈;T.布喬克曼;M.安德
• 申請（專利權）人: 思拓凡生物工藝研發有限公司
• 主分類號: C07K14/31
• 分類號: C07K14/31;C07K16/06;C07K1/22;B01D15/38;B01J20/289;B01J20/32
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 彭昶;萬雪松

一種堿穩定性改進的Fc結合多肽，其包含由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO 26或SEQ ID NO 27限定的葡萄球菌A蛋白(SpA)的Fc結合結構域的突變體，其中至少對應于SEQ ID NO:4?7中42位的位置處的丙氨酸殘基突變成精氨酸和/或其中至少對應于SEQ ID NO:4?7中37位的位置處的天冬氨酸殘基突變成谷氨酸。

發明的技術領域

本發明涉及親和層析領域，更具體地說涉及可用于免疫球蛋白的親和層析法的A蛋白的突變的免疫球蛋白結合結構域。本發明還涉及突變的結構域的多聚體和含有突變的結構域或多聚體的基質的分離。

發明前景

免疫球蛋白代表了全球制造或開發中最流行的生物制藥制品。對這一特殊治療市場的高商業需求和由此產生的價值導致重點投向制藥公司以在控制相關成本的同時使其相應的mAb生產過程的生產力最大化。

在大多數情況下采用親和層析法，作為在這些免疫球蛋白分子(例如單克隆或多克隆抗體)純化中的關鍵步驟之一。特別引人關注的親和試劑類別是能夠與免疫球蛋白分子的不可變部分特異性結合的蛋白質，這種相互作用獨立于抗體的抗原結合特異性。這類試劑廣泛用于親和層析法，從不同樣品(例如但不限于血清或血漿制備物或細胞培養來源的原料)中回收免疫球蛋白。這類蛋白質的一個實例是葡萄球菌A蛋白，其含有能夠與來自不同物種的IgG免疫球蛋白的Fc和Fab部分結合的結構域。

基于葡萄球菌A蛋白(SpA)的試劑由于其高親和力和選擇性而廣泛應用于生物技術，例如應用于親和層析法以用于俘獲和純化抗體以及用于檢測或定量。目前，基于SpA的親和培養基可能是最廣泛使用的親和培養基用于從不同的樣品(包括工業細胞培養上清液)中分離單克隆抗體及其片段。因此，包含A蛋白-配體的不同基質可以是市購獲得的，例如為天然A蛋白的形式(例如Protein A SEPHAROSE?, GE Healthcare, Uppsala,Sweden)，也包括重組A蛋白(例如rProtein A SEPHAROSE?, GE Healthcare)。更準確地說，在商用重組A蛋白產品中進行的遺傳操作的目的在于促進其與支持體的連接并提高配體的生產率。

像其它親和層析應用一樣，這些應用需要全面注意污染物的明確清除。這類污染物可以是例如層析程序中與固定相或基質吸附的未洗脫分子，例如不需要的生物分子或微生物，包括例如蛋白質、糖、脂質、細菌和病毒。為了在后續使用之前使基質再生，通常在第一次洗脫所需產物后進行從基質中清除這類污染物。這類清除通常包括稱為就地清洗(cleaning-in-place, CIP)的程序，其中使用能夠將污染物從固定相中洗脫的劑。常用的一種這類作用劑是流經所述固定相的堿性溶液。目前最廣泛使用的清潔消毒劑是NaOH，其濃度范圍可為0.1直到例如1 M，這取決于污染的程度和性質。該策略與將基質暴露于pH值高于13的溶液中有關。對于含有蛋白質性親和配體的許多親和層析基質，這類堿性環境是極嚴苛的條件，因此導致因配體對所涉及的高pH不穩定性所致的能力降低。