[發(fā)明專利]用于檢測查加斯病的抗原組合物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580060438.1
• 申請日: 2015-11-04
• 公開（公告）號: CN107003309B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: P.明希;D.羅斯勒;C.肖爾茨;B.烏普邁爾;T.扎爾恩特
• 申請（專利權(quán)）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權(quán)陸軍;黃希貴

本發(fā)明涉及由三種多肽1F8、JL7和Cruzipain組成的適用于檢測分離的生物樣品中針對克氏錐蟲(Trypanosoma cruzi,T.cruzi)的抗體的多肽的組合物。產(chǎn)生適用于使用所述多肽的組合物檢測針對克氏錐蟲的抗體的多肽的可溶性和免疫反應(yīng)性組合物的方法也是本發(fā)明的一部分。此外，本發(fā)明涉及用于檢測分離的樣品中對克氏錐蟲特異性的抗體的方法(其中使用所述克氏錐蟲多肽的組合物)以及包含所述克氏錐蟲多肽的組合物的試劑盒。

查加斯病是由鞭毛蟲原生動物克氏錐蟲(Trypanosoma cruzi)引起的熱帶寄生蟲病。克氏錐蟲通常通過昆蟲載體(即錐獵蝽亞科(subfamily Triatominae)(獵蝽科(familyReduviidae)，德文：“Raubwanzen”)的吸血“親吻蟲”)傳播給人類和其他哺乳動物。該疾病也可通過輸血和器官移植、攝入被寄生蟲污染的食物傳播以及從母親傳播到胎兒。

克氏錐蟲以不同形式和發(fā)育階段出現(xiàn)。繁殖形式被稱為短膜蟲期(epimastigote)，其恰好在接吻蟲已經(jīng)在包括人類的被感染的動物上吸血后適應(yīng)。短膜蟲移動到該蟲的直腸細(xì)胞壁上。該蟲在隨后的吸血（其中該蟲排便）中經(jīng)由其糞便將病原體轉(zhuǎn)移至下一宿主。感染形式被稱為錐鞭毛體，并通過咬傷進(jìn)入人體。因此，可以在人血中發(fā)現(xiàn)錐鞭毛體。發(fā)現(xiàn)的另一種形式(例如在心肌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的另一種形式)稱為無鞭毛體或微鞭毛體(micromastigote)。在克氏錐蟲的生命周期期間，無鞭毛體變?yōu)殄F鞭毛體，其可以在下一次吸血中被親吻蟲吸入。

查加斯病的癥狀在感染過程中有所不同。通常存在急性期，隨后是慢性期。感染后也可存在潛伏期。各期可以無癥狀或威脅生命。在早期、急性期，癥狀通常是輕度的，通常在感染部位僅僅產(chǎn)生局部腫脹。初始急性期對抗寄生蟲治療有反應(yīng)，治愈率為60-90％。4-8周后，具有活動性感染的個體進(jìn)入查加斯病的慢性期，其對于慢性感染個體的60-80％在其整個壽命中無癥狀。在慢性期期間，一些患者發(fā)生心臟并發(fā)癥，導(dǎo)致心臟擴(kuò)大、心力衰竭、心率改變和猝死。導(dǎo)致進(jìn)食或通便困難的腸道并發(fā)癥也是慢性期典型的。

抗寄生蟲治療也似乎延緩或預(yù)防疾病慢性期期間的疾病癥狀的發(fā)展，但根據(jù)美國疾病控制與預(yù)防中心，發(fā)展這些并發(fā)癥中的一種或多種的平均壽命風(fēng)險為約30％，這意味著這些慢性感染的個體仍將最終發(fā)展威脅生命的心臟和消化系統(tǒng)病癥。目前可用的查加斯病的抗寄生蟲治療是芐硝唑和硝呋莫司，其可以在許多患者中引起臨時副作用，包括皮膚病癥、腦毒性和消化系統(tǒng)刺激。

查加斯病主要出現(xiàn)在墨西哥、中美洲和南美洲的貧困農(nóng)村地區(qū)；非常罕見地，該疾病在美國南部被發(fā)現(xiàn)。然而，通過這些國家的體外診斷方法，篩選獻(xiàn)血者被克氏錐蟲的感染。

如今幾種血清學(xué)診斷方法可用來檢測克氏錐蟲的感染，例如，通過間接免疫熒光、間接血細(xì)胞凝集、補(bǔ)體固定、免疫印跡技術(shù)和ELISA檢測針對克氏錐蟲的抗體。還應(yīng)用分子生物學(xué)方法(例如PCR)和復(fù)雜的媒介生物診斷方法。在媒介生物診斷法中，使載體傳播的感染物，實(shí)驗(yàn)室培育的、無病原體昆蟲(此處為：接吻蟲)從患者吸取血液。然后檢查昆蟲的腸內(nèi)容物中病原體(此處為：克氏錐蟲)的存在。

這些方法中的每一種在靈敏度和特異性方面都顯示出其自身的弱點(diǎn)和優(yōu)勢，因此目前還沒有可用的金標(biāo)準(zhǔn)方法。

在開始開發(fā)查加斯測定法用于檢測抗體中，應(yīng)用了且仍正在使用天然抗原裂解物。然而，使用裂解物，在該抗原組合物中僅代表克氏錐蟲的三個發(fā)育階段之一，使得存在錯過其他兩個階段的感染的特定可能性。更現(xiàn)代的測定法應(yīng)用代表克氏錐蟲感染的所有階段的重組抗原的混合物。

當(dāng)使用天然抗原裂解物時，診斷測定法經(jīng)常面臨在另一種寄生蟲利什曼原蟲感染的患者樣品中觀察到的特異性和交叉反應(yīng)性中的問題。此外，由于克氏錐蟲的復(fù)雜抗原組成，抗原裂解物的產(chǎn)生導(dǎo)致相當(dāng)大的批次間變化。此外，非常經(jīng)常地，基于天然裂解物的稀有試劑顯示弱靈敏度，因?yàn)橐恍┝呀馕锿耆缓虿缓銐虻乃猩芷陔A段的抗原。