[發(fā)明專利]用于檢測(cè)查加斯病的抗原組合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580060438.1
• 申請(qǐng)日: 2015-11-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107003309B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: P.明希;D.羅斯勒;C.肖爾茨;B.烏普邁爾;T.扎爾恩特
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權(quán)陸軍;黃希貴

1.適用于檢測(cè)分離的生物樣品中針對(duì)克氏錐蟲(chóng)的抗體的多肽的組合物，所述組合物由三種重組或合成產(chǎn)生的對(duì)于克氏錐蟲(chóng)特異性的多肽組成，其中所述多肽為1F8、JL7和Cruzipain，其中1F8是鞭毛鈣結(jié)合蛋白3；JL7是鈣蛋白酶半胱氨酸肽酶，推定；和Cruzipain是主要半胱氨酸蛋白酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽的組合物，其中多肽1F8包含SEQ ID NO.1，多肽JL7包含SEQ ID NO.2且多肽Cruzipain包含SEQ ID NO.3。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多肽的組合物，其中所述組合物含有濃度為0.1至10毫摩爾/升的鈣離子。

4.產(chǎn)生由三種重組產(chǎn)生的多肽組成的適用于檢測(cè)針對(duì)克氏錐蟲(chóng)的抗體的多肽的可溶性和免疫反應(yīng)性組合物的方法，所述方法包括以下步驟：

a)培養(yǎng)用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，所述表達(dá)載體包含可操作連接的編碼第一克氏錐蟲(chóng)多肽1F8的重組DNA分子，

b)表達(dá)所述克氏錐蟲(chóng)多肽，和

c)純化所述克氏錐蟲(chóng)多肽，

d)用表達(dá)載體重復(fù)步驟a)至c)，所述表達(dá)載體包含可操作連接的編碼第二克氏錐蟲(chóng)多肽JL7的重組DNA分子

e)用表達(dá)載體重復(fù)步驟a)至c)，所述表達(dá)載體包含可操作連接的編碼第三克氏錐蟲(chóng)多肽Cruzipain的重組DNA分子

f)形成步驟c)、d)和e)中獲得的克氏錐蟲(chóng)多肽的混合物，從而產(chǎn)生適合于檢測(cè)針對(duì)克氏錐蟲(chóng)的抗體的多肽的可溶性和免疫反應(yīng)性組合物，

其中1F8是鞭毛鈣結(jié)合蛋白3；JL7是鈣蛋白酶半胱氨酸肽酶，推定；和Cruzipain是主要半胱氨酸蛋白酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多肽的組合物在制備試劑中的用途，所述試劑用于檢測(cè)分離的樣品中的對(duì)于克氏錐蟲(chóng)特異性的抗體的方法，其中根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多肽的組合物用作抗克氏錐蟲(chóng)抗體的捕獲試劑和/或結(jié)合配偶體。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多肽的組合物在制備試劑中的用途，所述試劑用于檢測(cè)分離的樣品中的對(duì)于多肽的組合物特異性的抗體的方法，所述方法包括

a)通過(guò)將體液樣品與根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多肽的組合物混合而形成免疫反應(yīng)混合物

b)將所述免疫反應(yīng)混合物保持一定時(shí)間段，所述時(shí)間段足以使體液樣品中存在的針對(duì)所述多肽的組合物的抗體與所述多肽的組合物免疫反應(yīng)以形成免疫反應(yīng)產(chǎn)物；和

c) 檢測(cè)所述免疫反應(yīng)產(chǎn)物中的任一種的存在和/或濃度。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中以雙抗原夾心形式實(shí)施免疫反應(yīng)，包括

a)向所述樣品添加具有與固相結(jié)合的能力的第一多肽的組合物和第二多肽的組合物，所述第一多肽的組合物各自攜帶作為生物親和結(jié)合對(duì)的一部分的效應(yīng)基團(tuán)，且所述第二多肽的組合物各自攜帶可檢測(cè)的標(biāo)記物，其中所述第一和第二多肽的組合物特異性結(jié)合所述抗克氏錐蟲(chóng)抗體，并且其中所述第一和第二多肽的組合物都如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所限定，

b)形成包含第一多肽的組合物、樣品抗體和第二多肽的組合物的免疫反應(yīng)混合物，其中在形成免疫反應(yīng)混合物之前、期間或之后添加攜帶所述生物親和結(jié)合對(duì)的相應(yīng)效應(yīng)基團(tuán)的固相，

c)將所述免疫反應(yīng)混合物保持一定時(shí)間段，所述時(shí)間段足以使體液樣品中針對(duì)所述第一和第二多肽的組合物的抗克氏錐蟲(chóng)抗體與所述第一和第二多肽的組合物免疫反應(yīng)以形成免疫反應(yīng)產(chǎn)物，

d)將液相與固相分離

e) 檢測(cè)所述固相或液相或兩者中所述免疫反應(yīng)產(chǎn)物中的任一種的存在。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其中所述第一多肽的組合物攜帶生物素部分，且所述第二多肽的組合物用電化學(xué)發(fā)光釕絡(luò)合物標(biāo)記。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多肽的組合物或通過(guò)權(quán)利要求4的方法獲得的可溶性和免疫反應(yīng)性組合物在制備試劑中的用途，所述試劑用于檢測(cè)抗克氏錐蟲(chóng)抗體的體外診斷測(cè)試中。

10.用于檢測(cè)抗克氏錐蟲(chóng)抗體的試劑盒，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多肽的組合物或通過(guò)權(quán)利要求4的方法獲得的可溶性和免疫反應(yīng)性組合物。