[發明專利]確定循環RNA的分布譜的方法

在審

• 申請號: 201580059730.1
• 申請日: 2015-09-03
• 公開（公告）號: CN107076709A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 鐘文婉;J·艾詩;K·弗拉克
• 申請（專利權）人: 加利福尼亞大學董事會
• 主分類號: G01N30/00
• 分類號: G01N30/00;C12Q1/68;C07H21/02;C12N15/113
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司11262
• 代理人: 李平,鄭霞

1.一種用于確定樣品中循環RNA的分布的分級方法，其包括：

將從受試者獲得的生物流體樣品分級成至少包含外泌體級分、蛋白質級分和脂蛋白級分的級分，其中每個級分包含RNA載體；

確定或定量每個所述級分中的RNA以產生所述樣品中所述RNA針對RNA載體的分布譜。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述分級是通過對所述樣品進行非對稱流動場流分級(AF4)并收集多個洗脫液。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述分級是通過基于芯片的微流體系統。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述生物流體樣品是血清樣品。

5.根據權利要求2所述的方法，其中使用厚度為約0.350mm且頂端到頂端長度為約275mm的、入口三角形寬度為約20mm且出口寬度為約5mm的梯形分離通道來分級血清樣品。

6.根據權利要求5所述的方法，其中積聚壁

的表面積為約3160mm²，分子量截止值為10kDA。

7.根據權利要求2所述的方法，其中所述多個洗脫液是在20分鐘至25分鐘的時間段內作為1分鐘洗脫液被收集的。

8.根據權利要求2所述的方法，其中從所述多個洗脫液產生所述生物流體樣品的至少6個級分。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述6個級分由合并在6個單獨且非重疊的時間段內收集的1分鐘洗脫液產生。

10.根據權利要求9所述的方法，其中每個所述6個級分富集具有特定流體動力學直徑的RNA載體蛋白質。

11.根據權利要求1所述的方法，其中所述級分富集蛋白質、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和外泌體。

12.根據權利要求1所述的方法，其中通過深度測序或RT-qPCR來確定或定量所述RNA。

13.根據權利要求1所述的方法，其中所述RNA包括微RNA或lncRNA、或病毒RNA。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述微RNA或lncRNA或病毒RNA是與疾病或病癥相關的生物標志物。

15.根據權利要求14所述的方法，其中所述病癥是癌癥。

16.根據權利要求15所述的方法，其中所述癌癥是乳腺癌。

17.根據權利要求1所述的方法，其中RNA組為包含序列SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8和/或9的微RNA。