[發(fā)明專利]錯折疊蛋白質(zhì)的檢測

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580058606.3
• 申請日: 2015-09-11
• 公開（公告）號: CN107208125A
• 公開（公告）日: 2017-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: C·S·捷瑞;M·沙赫納瓦茲;R·M·萊博維茲;B·K·沃爾拉特
• 申請（專利權(quán)）人: 德克薩斯大學系統(tǒng)董事會;安培里翁公司;C·S·捷瑞;M·沙赫納瓦茲;R·M·萊博維茲;B·K·沃爾拉特
• 主分類號: C12Q1/00
• 分類號: C12Q1/00;G01N33/00;A61K38/00
• 代理公司: 北京市鑄成律師事務(wù)所11313
• 代理人: 郗名悅,王建秀

相關(guān)申請的交叉引用

本申請要求2014年9月11日提交的美國臨時專利申請No.62/049,306的優(yōu)先權(quán)，該臨時專利申請的全部內(nèi)容以引用方式并入本文。

背景

蛋白質(zhì)錯折疊病癥(PMD)包括：阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、2型糖尿病、亨延頓氏舞蹈病、肌萎縮性側(cè)索硬化、系統(tǒng)性淀粉樣變性、朊病毒病等。不同蛋白質(zhì)的錯折疊聚集體可形成并且積聚。除了其他效應(yīng)外，錯折疊聚集體可誘發(fā)細胞功能障礙和組織損傷。

例如，阿爾茨海默氏病(AD)和帕金森氏病(PD)是無有效治療或準確臨床前診斷的退行性腦障礙。在AD中，例如，迄今的證據(jù)表明，淀粉樣-β蛋白(Aβ)的錯折疊、聚集和腦沉積可為AD病狀的觸發(fā)因素。雖然Aβ斑塊最初被認為是疾病的標志，但當前的研究表明，可溶性Aβ低聚物可能是引起AD中神經(jīng)變性的關(guān)鍵突觸-毒性物質(zhì)。因為大腦的再生能力低，所以PMD的早期診斷對于允許在發(fā)生不可逆神經(jīng)病理變化之前進行干預(yù)而言是至關(guān)重要的。若干條證據(jù)表明，錯折疊和低聚過程可以在臨床癥狀和實質(zhì)性腦損傷發(fā)作前的幾年或幾十年開始。缺乏廣泛接受的早期、靈敏以及客觀的實驗室診斷對于罹患PMD患者的護理而言仍然是主要問題。

本申請意識到，對蛋白質(zhì)錯折疊進行檢測(例如)以診斷相關(guān)疾病可能是一項充滿挑戰(zhàn)性的工作。

概述

在一個實施方案中，提供了一種用于確定樣品中可溶性錯折疊蛋白質(zhì)的存在的方法。所述方法可包括使樣品與單體折疊蛋白質(zhì)接觸以形成孵育混合物。所述方法可包括進行孵育循環(huán)兩次或更多次以有效形成錯折疊蛋白質(zhì)的擴增部分。每個孵育循環(huán)可包括對孵育混合物進行孵育以在可溶性錯折疊蛋白質(zhì)的存在下有效引起單體折疊蛋白質(zhì)的至少一部分的錯折疊和/或聚集。每個孵育循環(huán)可包括物理地破壞孵育混合物以有效分解所存在的任何蛋白質(zhì)聚集體的至少一部分，例如以釋放可溶性錯折疊蛋白質(zhì)。所述方法可包括通過檢測可溶性錯折疊蛋白質(zhì)的至少一部分來確定樣品中可溶性錯折疊蛋白質(zhì)的存在?？扇苄藻e折疊蛋白質(zhì)可包括下列的一種或多種：可溶性錯折疊單體和可溶性錯折疊聚集體。錯折疊蛋白質(zhì)的擴增部分可包括下列的一種或多種：可溶性錯折疊單體的擴增部分、可溶性錯折疊聚集體的擴增部分以及不溶性錯折疊聚集體。單體折疊蛋白質(zhì)和可溶性錯折疊蛋白質(zhì)可排除朊病毒蛋白質(zhì)(PrP)及其同種型。

在另一個實施方案中，提供了一種用于確定樣品中可溶性錯折疊蛋白質(zhì)的存在的方法。所述方法可包括使樣品與硫磺素T和摩爾過量的單體折疊蛋白質(zhì)接觸以形成孵育混合物。所述摩爾過量可大于樣品中的可溶性錯折疊蛋白質(zhì)中所包括的蛋白質(zhì)單體的量。所述方法可包括進行孵育循環(huán)兩次或更多次以有效形成錯折疊蛋白質(zhì)的擴增部分。每個孵育循環(huán)可包括對孵育混合物進行孵育以在可溶性錯折疊蛋白質(zhì)的存在下有效引起單體折疊蛋白質(zhì)的至少一部分的錯折疊和/或聚集，從而形成錯折疊蛋白質(zhì)的擴增部分。每個孵育循環(huán)可包括振蕩孵育混合物以有效分解所存在的任何蛋白質(zhì)聚集體的至少一部分，例如以釋放可溶性錯折疊蛋白質(zhì)。所述方法還可包括通過檢測與可溶性錯折疊蛋白質(zhì)對應(yīng)的硫磺素T的熒光來確定樣品中可溶性錯折疊蛋白質(zhì)的存在?？扇苄藻e折疊蛋白質(zhì)可包括下列的一種或多種：可溶性錯折疊單體和可溶性錯折疊聚集體。錯折疊蛋白質(zhì)的擴增部分可包括下列的一種或多種：可溶性錯折疊單體的擴增部分、可溶性錯折疊聚集體的擴增部分以及不溶性錯折疊聚集體。單體折疊蛋白質(zhì)和可溶性錯折疊蛋白質(zhì)排除朊病毒蛋白質(zhì)(PrP)及其同種型。