[發(fā)明專利]錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的檢測(cè)

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580058606.3
• 申請(qǐng)日: 2015-09-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107208125A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: C·S·捷瑞;M·沙赫納瓦茲;R·M·萊博維茲;B·K·沃爾拉特
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 德克薩斯大學(xué)系統(tǒng)董事會(huì);安培里翁公司;C·S·捷瑞;M·沙赫納瓦茲;R·M·萊博維茲;B·K·沃爾拉特
• 主分類號(hào): C12Q1/00
• 分類號(hào): C12Q1/00;G01N33/00;A61K38/00
• 代理公司: 北京市鑄成律師事務(wù)所11313
• 代理人: 郗名悅,王建秀

1.一種用于確定樣品中可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的存在的方法，其包括：

使所述樣品與對(duì)應(yīng)于所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的單體折疊蛋白質(zhì)接觸以形成孵育混合物；

進(jìn)行孵育循環(huán)兩次或更多次以有效形成錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的擴(kuò)增部分，每個(gè)孵育循環(huán)包括：

對(duì)所述孵育混合物進(jìn)行孵育以在所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的存在下有效引起所述單體折疊蛋白質(zhì)的至少一部分的錯(cuò)折疊和/或聚集；

物理地破壞所述孵育混合物以有效分解所存在的任何蛋白質(zhì)聚集體的至少一部分；和

通過(guò)檢測(cè)所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的至少一部分來(lái)確定所述樣品中所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的存在，

所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)包括下列的一種或多種：可溶性錯(cuò)折疊單體和可溶性錯(cuò)折疊聚集體；并且

所述錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的擴(kuò)增部分包括下列的一種或多種：所述可溶性錯(cuò)折疊單體的擴(kuò)增部分、所述可溶性錯(cuò)折疊聚集體的擴(kuò)增部分以及不溶性錯(cuò)折疊聚集體，

前提條件是所述單體折疊蛋白質(zhì)和所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)排除朊病毒蛋白質(zhì)(PrP)及其同種型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，

其還包括使所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的指示劑與所述孵育混合物接觸，所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的指示劑的特征為在存在所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)時(shí)的指示狀態(tài)以及在不存在所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)時(shí)的非指示狀態(tài)；并且

其中所述確定所述樣品中所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的存在包括檢測(cè)所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的所述指示劑的所述指示狀態(tài)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，所述指示劑的所述指示狀態(tài)和所述指示劑的所述非指示狀態(tài)的特征為熒光的差異，所述確定所述樣品中所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的存在包括檢測(cè)熒光的所述差異。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其包括使摩爾過(guò)量的所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的所述指示劑與所述孵育混合物接觸，所述摩爾過(guò)量大于所述孵育混合物中的所述單體折疊蛋白質(zhì)和所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)中所包括的蛋白質(zhì)單體的總摩爾量。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的指示劑包括下列的一種或多種：硫磺素T、剛果紅、m-I-均二苯代乙烯、柯胺G、PIB、BF-227、X-34、TZDM、FDDNP、MeO-X-04、IMPY、NIAD-4、發(fā)光共軛聚噻吩、熒光蛋白及其衍生物。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述確定所述樣品中所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的存在包括確定所述樣品中所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的量。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其包括以下列中至少約一個(gè)或多個(gè)的敏感性來(lái)檢測(cè)所述樣品中所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的量：80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其包括檢測(cè)所述樣品中所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的量，所述量小于下列中的約一個(gè)或多個(gè)：100nmol、10nmol、1nmol、100pmol、10pmol、1pmol、100fmol、10fmol、3fmol、1fmol、100attomol、10attomol和1attomol。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其包括以與所述樣品中所含的單體折疊蛋白質(zhì)的摩爾比率來(lái)檢測(cè)所述樣品中所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)的量，所述摩爾比率小于下列中的約一個(gè)或多個(gè)：1:100、1:10,000、1:100,000和1:1,000,000。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其包括以下列中至少約一個(gè)或多個(gè)的特異性來(lái)檢測(cè)所述樣品中的所述可溶性錯(cuò)折疊蛋白質(zhì)：80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其包括制備包含濃度為下列中一個(gè)或多個(gè)的所述單體折疊蛋白質(zhì)的所述孵育混合物：介于約1nM和約2mM之間；介于約10nM和約200μM之間；介于約100nM和約20μM之間；介于約1μM和約10μM之間；約7μM；和約2μM。