[發(fā)明專(zhuān)利]重組克氏錐蟲(chóng)JL7抗原變體及其用于檢測(cè)查加斯病的用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580058514.5
• 申請(qǐng)日: 2015-11-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107074921B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: D.羅斯勒;B.烏普邁爾;T.扎爾恩特
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/44
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/44;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 中國(guó)專(zhuān)利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 唐華東;黃希貴

本發(fā)明涉及適合于檢測(cè)分離的生物樣品中針對(duì)克氏錐蟲(chóng)(引起查加斯病)的抗體的JL7抗原的變體。這些抗原包含JL7特異性氨基酸序列，所述JL7特異性序列由兩個(gè)拷貝的SEQ ID NO.2組成，其中所述兩個(gè)拷貝中的每一個(gè)與SEQ ID NO.2具有至少90％的氨基酸同一性，并且其中所述多肽中不存在進(jìn)一步的克氏錐蟲(chóng)特異性氨基酸序列。本發(fā)明還涉及可用于檢測(cè)針對(duì)克氏錐蟲(chóng)的抗體的多肽的組合物，其包含上述表征的JL7抗原連同克氏錐蟲(chóng)多肽1F8、Cruzipain、KMP?11和PAR?2中的至少一種。此外，其涉及用于產(chǎn)生JL7抗原的方法以及用于使用JL7多肽檢測(cè)克氏錐蟲(chóng)抗體的診斷方法。此外，本發(fā)明涉及包含所述JL7多肽或克氏錐蟲(chóng)多肽的組合物的試劑盒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及重組克氏錐蟲(chóng)JL7抗原變體及其用于檢測(cè)查加斯病的用途。

背景技術(shù)

克氏錐蟲(chóng)（Trypanosoma cruzi）是引起被稱(chēng)為查加斯病的熱帶寄生蟲(chóng)病的鞭毛蟲(chóng)原生動(dòng)物。在查加斯病過(guò)程中，受感染的患者通常通過(guò)急性期，隨后為慢性期，其具有介于溫和和威脅生命之間的不同癥狀。只有在初期階段，患者才能對(duì)抗寄生蟲(chóng)治療有響應(yīng)。一些患者發(fā)生導(dǎo)致死亡的心臟或腸道并發(fā)癥。

克氏錐蟲(chóng)通常通過(guò)昆蟲(chóng)載體(即錐獵蝽亞科(subfamily Triatominae)(獵蝽科(family Reduviidae)，德文：“Raubwanzen”)的吸血“親吻蟲(chóng)”)傳播給人類(lèi)和其他哺乳動(dòng)物。該疾病也可通過(guò)輸血和器官移植、攝入被寄生蟲(chóng)污染的食物而傳播以及從母親傳播到胎兒。為了防止查加斯病的進(jìn)一步傳播，重要的是基于血液中的寄生蟲(chóng)的存在和針對(duì)克氏錐蟲(chóng)的抗體篩選獻(xiàn)血和醫(yī)療產(chǎn)品，特別是在主要感染的區(qū)域，如墨西哥、中南美洲和美國(guó)南部。

如今，幾種血清學(xué)診斷方法可用來(lái)檢測(cè)克氏錐蟲(chóng)的感染，例如，通過(guò)間接免疫熒光、間接血細(xì)胞凝集、補(bǔ)體固定、免疫印跡技術(shù)和ELISA檢測(cè)針對(duì)克氏錐蟲(chóng)的抗體。還應(yīng)用分子生物學(xué)方法(例如PCR)和復(fù)雜的媒介生物診斷方法。在媒介生物診斷法中，使載體傳播的感染物，實(shí)驗(yàn)室培育的、無(wú)病原體昆蟲(chóng)(此處為：接吻蟲(chóng))從患者吸取血液。然后檢查昆蟲(chóng)的腸內(nèi)容物中病原體(此處為：克氏錐蟲(chóng))的存在。

這些方法中的每一種在靈敏度和特異性方面都顯示出其自身的弱點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，因此目前還沒(méi)有可用的金標(biāo)準(zhǔn)方法。

在開(kāi)始開(kāi)發(fā)查加斯測(cè)定法用于檢測(cè)抗體中，應(yīng)用了且仍正在使用天然抗原裂解物。然而，使用裂解物，在該抗原組合物中僅代表克氏錐蟲(chóng)的三個(gè)發(fā)育階段之一，使得存在錯(cuò)過(guò)其他兩個(gè)階段的感染的特定可能性。更現(xiàn)代的測(cè)定法應(yīng)用代表克氏錐蟲(chóng)感染的所有階段的重組抗原的混合物。

用于檢測(cè)針對(duì)克氏錐蟲(chóng)抗原的抗體的血清學(xué)測(cè)定已經(jīng)在現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)中廣泛描述。例如Silveira等人 (Trends in Parasitology 2001, Vol. 17 No. 6, p. 286-291)描述了已經(jīng)由幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室分離了與血清診斷相關(guān)的克氏錐蟲(chóng)重組抗原。這些基因中的幾個(gè)具有串聯(lián)重復(fù)的序列，得到顯示重復(fù)的氨基酸序列基序的蛋白。

在用于檢測(cè)針對(duì)克氏錐蟲(chóng)的抗體的血清學(xué)測(cè)定中廣泛使用的抗原之一是JL7，UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)條目號(hào)Q4CS87，其也通過(guò)同義詞FRA、Ag1和H49描述(對(duì)于綜述，參見(jiàn)例如Cotrim等人 1995, Mol Biochem Parasitol 71, 89-98和Umezawa等人 1999, J ClinMicrobiol, 1554-1560)。Silveira等人(同上)也描述了用于ELISA測(cè)定中的各種額外的克氏錐蟲(chóng)抗原的幾種混合物中的FRA (JL7)。沒(méi)有公開(kāi)特定JL7相關(guān)多肽。

Valiente-Gabioud等人(Exp. Parasitol. 2011, 127, p. 672-679)討論了重復(fù)性對(duì)克氏錐蟲(chóng)FRA(JL7)蛋白的免疫原性和抗原性的影響。建議使用四個(gè)重復(fù)的重復(fù)以得到令人滿意的來(lái)自人受感染血清的ELISA信號(hào)。沒(méi)有解決測(cè)定特異性的問(wèn)題，并且沒(méi)有公開(kāi)特定JL7多肽。