[發明專利]重組克氏錐蟲JL7抗原變體及其用于檢測查加斯病的用途

有效

• 申請號: 201580058514.5
• 申請日: 2015-11-04
• 公開（公告）號: CN107074921B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: D.羅斯勒;B.烏普邁爾;T.扎爾恩特
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C07K14/44
• 分類號: C07K14/44;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 唐華東;黃希貴

1.適用于檢測分離的生物樣品中的針對克氏錐蟲的抗體的多肽，其包含JL7特異性氨基酸序列，其中所述克氏錐蟲JL7特異性氨基酸序列由SEQ ID NO. 4組成，并且其中所述多肽中不存在進一步的克氏錐蟲特異性氨基酸序列。

2.適用于檢測分離的生物樣品中的針對克氏錐蟲抗原的抗體的多肽的組合物，其包含根據權利要求1所述的多肽和至少一種選自1F8、Cruzipain、KMP-11和PAR-2的克氏錐蟲多肽。

3.產生可溶性和免疫反應性克氏錐蟲JL7多肽的方法，所述方法包括以下步驟

a)培養用表達載體轉化的宿主細胞，所述表達載體包含可操作連接的重組DNA分子，所述重組DNA分子編碼根據權利要求1所述的克氏錐蟲JL7多肽，

b)表達所述克氏錐蟲JL7多肽，和

c)純化所述克氏錐蟲JL7多肽。

4.根據權利要求1所述的克氏錐蟲JL7多肽或根據權利要求2所述的克氏錐蟲多肽的組合物在制備試劑中的用途，所述試劑用于檢測分離的樣品中的對于克氏錐蟲特異性的抗體，其中根據權利要求1所述的克氏錐蟲JL7多肽或根據權利要求2所述的克氏錐蟲多肽的組合物用作所述克氏錐蟲抗體的捕獲試劑和/或結合配偶體。

5.根據權利要求1所述的克氏錐蟲JL7多肽或根據權利要求2所述的克氏錐蟲多肽的組合物在制備試劑中的用途，所述試劑用于檢測分離的樣品中的對于克氏錐蟲抗原特異性的抗體，所述檢測包括

a)通過將體液樣品與根據權利要求1所述的克氏錐蟲JL7多肽或根據權利要求2所述的組合物混合而形成免疫反應混合物，

b)將所述免疫反應混合物保持足以使體液樣品中存在的針對所述多肽樣品的組合物的抗體與所述克氏錐蟲多肽的組合物免疫反應以形成免疫反應產物的時間段；和

c) 檢測所述免疫反應產物中的任一種的存在和/或濃度。

6.根據權利要求5所述的用途，其中以雙抗原夾心形式實施所述免疫反應，所述方法包括

a)向所述樣品添加可以直接或間接地結合至固相的第一根據權利要求1所述的克氏錐蟲JL7多肽和第二根據權利要求1所述的克氏錐蟲JL7多肽，所述第一克氏錐蟲多肽攜帶作為生物親和結合對的一部分的效應基團，且所述第二克氏錐蟲JL7多肽攜帶可檢測的標記物，其中所述第一和第二克氏錐蟲JL7多肽特異性結合所述抗克氏錐蟲抗體，

b)形成包含所述第一克氏錐蟲JL7多肽、所述樣品抗體和所述第二克氏錐蟲JL7多肽的免疫反應混合物，其中在形成所述免疫反應混合物之前、期間或之后添加攜帶所述生物親和結合對的相應效應基團的固相，

c)將所述免疫反應混合物保持足以使體液樣品中針對所述第一和第二克氏錐蟲JL7多肽的克氏錐蟲抗體與所述第一和第二克氏錐蟲多肽免疫反應以形成免疫反應產物的時間段，

d)將液相與固相分離

e) 檢測所述固相或液相或兩者中所述免疫反應產物中的任一種的存在。

7.根據權利要求6所述的用途，其中所述第一克氏錐蟲JL7多肽攜帶生物素部分，且所述第二克氏錐蟲JL7多肽用電化學發光釕絡合物標記。

8.根據權利要求1所述的克氏錐蟲JL7多肽或根據權利要求2所述的組合物在制備試劑中的用途，所述試劑用于檢測抗克氏錐蟲抗體的體外診斷測試。

9.用于檢測抗克氏錐蟲抗體的試劑盒，其包含根據權利要求1所述的克氏錐蟲JL7多肽或根據權利要求2所述的組合物。