[發(fā)明專利]體外膽汁排泄測定法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580058484.8
• 申請日: 2015-09-02
• 公開（公告）號: CN107208050A
• 公開（公告）日: 2017-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: E·諾維克;C·曹;A·帕雷克;R·弗里德曼;M·L·亞爾穆什;E·普魯?shù)挛乃够?/a>
• 申請（專利權(quán)）人: 休雷爾公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/04
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所11494
• 代理人: 封新琴

1.一種表征化學(xué)實(shí)體的膽汁排泄的體外方法，其包括：

a)提供包含形成至少一個(gè)膽小管的肝細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物；

b)使所述細(xì)胞培養(yǎng)物與第一化學(xué)實(shí)體接觸足以允許由所述培養(yǎng)物中的肝細(xì)胞攝取所述化學(xué)實(shí)體的時(shí)間；

c)在不裂解所述肝細(xì)胞的情況下破壞所述至少一個(gè)膽小管，并且檢測由所述至少一個(gè)膽小管釋放的所述第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量(如果有的話)；并且

d)裂解所述肝細(xì)胞，并檢測由所述肝細(xì)胞釋放的所述第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物是包含布置在固體基底的表面上的肝細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的肝細(xì)胞-基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)物。

3.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟c)中由所述至少一個(gè)膽小管釋放的所述第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量高于在步驟d)中由所述肝細(xì)胞釋放的所述第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量。

4.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟c)中由所述至少一個(gè)膽小管釋放的所述第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量低于在步驟d)中由所述肝細(xì)胞釋放的所述第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量。

5.權(quán)利要求1的方法，其中使用LC-MS/MS檢測步驟c)和/或d)中第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量。

6.權(quán)利要求1的方法，其中所述第一化學(xué)實(shí)體不包含標(biāo)記物。

7.權(quán)利要求1的方法，其中通過在包含拉春庫林A(LatA)和/或不包含鈣的培養(yǎng)基中溫育所述培養(yǎng)物而在不裂解所述培養(yǎng)物中的肝細(xì)胞的情況下破壞所述至少一個(gè)膽小管。

8.權(quán)利要求1的方法，其還包括在所述細(xì)胞培養(yǎng)物中對所述第一化學(xué)實(shí)體測定內(nèi)在膽汁清除(CL_膽汁)和/或膽汁排泄指數(shù)(BEI)。

9.權(quán)利要求8的方法，其還包括將所述第一化學(xué)實(shí)體的CL_膽汁和/或BEI與對照化學(xué)實(shí)體的CL_膽汁和/或BEI比較，并且基于所述比較來表征所述第一化學(xué)實(shí)體的膽汁排泄。

10.權(quán)利要求1的方法，其中在所述肝細(xì)胞中抑制至少一種肝細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性。

11.權(quán)利要求1的方法，其還包括在步驟b)中使所述細(xì)胞培養(yǎng)物與第二化學(xué)實(shí)體接觸。

12.權(quán)利要求11的方法，其還包括在步驟c)中檢測由所述至少一個(gè)膽小管釋放的所述第二化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量。

13.權(quán)利要求12的方法，其還包括在步驟d)中檢測由所述肝細(xì)胞釋放的所述第二化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量。

14.一種表征化學(xué)實(shí)體的膽汁排泄的體外方法，其包括：

a)提供包含形成至少一個(gè)膽小管的肝細(xì)胞的第一細(xì)胞培養(yǎng)物，其中在所述第一細(xì)胞培養(yǎng)物的所述肝細(xì)胞中抑制至少一種肝細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性；

b)使所述第一細(xì)胞培養(yǎng)物與第一化學(xué)實(shí)體接觸；

c)在不裂解所述第一細(xì)胞培養(yǎng)物中的所述肝細(xì)胞的情況下破壞所述第一細(xì)胞培養(yǎng)物中的至少一個(gè)膽小管，并且檢測由所述至少一個(gè)膽小管釋放的所述第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量(如果有的話)；

d)裂解所述第一細(xì)胞培養(yǎng)物中的肝細(xì)胞，并檢測由所述肝細(xì)胞釋放的所述第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量；

e)提供包含形成至少一個(gè)膽小管的肝細(xì)胞的第二細(xì)胞培養(yǎng)物，其中在所述第二細(xì)胞培養(yǎng)物的所述肝細(xì)胞中不抑制所述至少一種肝細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性；

f)使所述第二細(xì)胞培養(yǎng)物與所述第一化學(xué)實(shí)體接觸；

g)在不裂解所述第二細(xì)胞培養(yǎng)物中的所述肝細(xì)胞的情況下破壞所述第二細(xì)胞培養(yǎng)物中的至少一個(gè)膽小管，并且檢測由所述至少一個(gè)膽小管釋放的所述第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量(如果有的話)；并且

h)裂解所述第二細(xì)胞培養(yǎng)物中的肝細(xì)胞，并檢測由所述肝細(xì)胞釋放的所述第一化學(xué)實(shí)體和/或其代謝物的量。

15.權(quán)利要求14的方法，其中所述第一和第二細(xì)胞培養(yǎng)物是肝細(xì)胞-基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)物，其包含布置在固體基底的表面上的肝細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞。