[發明專利]使用間接ELISA測量包含人FC的蛋白質滴度的試劑盒及用其測量含人FC的蛋白質滴度的方法

有效

• 申請號: 201580058076.2
• 申請日: 2015-09-30
• 公開（公告）號: CN107110870B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 辛庸源;李柱浩;林正愛;張基奐;金敏洙
• 申請（專利權）人: 株式會社綠十字
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11435
• 代理人: 陳姍姍;郭棟梁

本申請提供了用于測量人血漿或血清中人抗體、人源化抗體或人Fc融合蛋白的滴度的試劑盒，以及使用其測量人血漿或血清中含有人Fc的蛋白質的滴度的方法，更具體地，提供了用于測量人血漿或血清中含有人Fc的蛋白質滴度的試劑盒，該試劑盒包括樣品用稀釋劑、綴合物用稀釋劑和清洗溶液，并用于通過間接酶聯免疫吸附測定(間接ELISA)進行分析，以及使用其測量人血漿或血清中含有人Fc的蛋白質的滴度的方法。

技術領域

本發明涉及用于測量包含人Fc的蛋白質滴度的試劑盒以及用其測量包含人Fc的蛋白質滴度的方法，更具體地，涉及用于測量人血漿或血清中包含人Fc的蛋白質滴度的試劑盒，所述試劑盒包括樣品用稀釋劑、綴合物用稀釋劑以及洗滌液，并且用于通過間接的酶聯免疫吸附測定(下文稱為間接ELISA)進行分析，并且本發明涉及用其測量人血漿或血清中包含人Fc的蛋白質滴度的方法。

背景技術

在感染乙型肝炎病毒或接種乙型肝炎病毒疫苗后產生抗乙型肝炎病毒表面抗原抗體(抗HB Ag抗體)，其被用于通過抗HB抗體滴度試驗(確定10mIU/mL或更低的抗HB濃度為非免疫性抗HB濃度)測量所產生的抗HB抗體的濃度來檢測乙型肝炎病毒疫苗的結果。此外，在患有作為基礎疾病的乙型肝炎病毒的乙型肝炎的肝移植中，使用抗HB Ag抗體來檢測給藥乙肝免疫球蛋白(HBIG)時抗HB抗體的滴度，以便防止再次感染乙型肝炎病毒。

作為分析抗HB抗體滴度的方法，可以使用酶免疫測量法(EIA)、化學發光微粒免疫測量法(CMIA)、放射免疫測量法(RIA)等。(El-Madhun等人，Vaccine，16：156-160,1998；L.Hahaheim等人，International Congress Series，1219：283-289,2001；Odd Odinsen等人，Clin.Vaccine Immunol.，14(10)：1623-1628,2007；P.Kryger等人，J.Clin.Microbiol.，13：405-409,1981)。

用于分析抗HB抗體滴度的方法是通過在微孔板或微粒上涂布乙型肝炎病毒的表面抗原(HB Ag)，使表面抗原與要測量的樣品反應，然后通過使用與酶或放射性同位素結合的乙型肝炎病毒的表面抗原(HB Ag)來測量顯色、發光或同位素的量，從而測量抗體的滴度。

代表性的IgG抗體的具有Y形狀。如圖1A所示，抗原結合位點存在于Y形的兩端，使得抗原與每個位點結合。如圖1A所示，通常當將包被在底部的乙型肝炎病毒的表面抗原(以下稱為被包被的HB Ag)結合到抗HB抗體的抗原結合位點的一個位點，并且用酶或放射性同位素標記的乙型肝炎病毒的表面抗原(以下稱為標記的HB Ag)與其它位點結合，即表面抗原與每個位點結合時，進行滴度測量。

然而，當測量由株式會社綠十字開發的抗HB單克隆抗體的滴度時，根據圖1A所述的方法，不需要人血漿或血清，測量的滴度比圖1D中描述的方法低約20至100倍。認為通過圖1A的方法測量的抗HB單克隆抗體的抗HB滴度較低的原因實際上可能是由于組合引起的概率誤差，例如圖1B或圖1C。也就是說，可發生其中待測抗體的兩個結合位點與被包被的HBAg或標記的HB Ag兩者結合的情形(圖1B)，或者當抗體的其它位點與抗原結合時抗體的一個結合位點不能結合一個抗原的情形(圖1C)，因此可能不能精確測量抗體的量。

此外，即使通過圖1D所示的方法測量滴度以克服上述問題，但是當使用由株式會社綠十字開發的諸如抗HB單克隆抗體的完全人抗體時，可發生如圖2所示的完全人抗體與人血漿或血清中原來存在的其他人抗體的非特異性結合，并且識別包含人Fc的蛋白質的二抗不能區分抗HB單克隆抗體的非特異性結合和特異性結合，引起高背景噪音，因此通常仍難以測量滴度。

為了解決上述缺點，本發明人發現通過基于間接ELISA測量滴度的方法，僅通過精確測量可減小諸如圖1D的特異反應的測量誤差；然而，測試對象中抗體滴度的測量精度仍然很低。